[發明專利]人肺癌高轉移細胞系SPC-A-1sci的建立

有效

• 申請號: 200710048188.7
• 申請日: 2007-11-14
• 公開（公告）號: CN101434935A
• 公開（公告）日: 2009-05-20
• 發明（設計）人: 姚明;閆明霞;劉蕾;孔韓衛;莢德水;吳海燕
• 申請（專利權）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08;C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 徐 迅

技術領域

本發明屬于細胞生物學領域，更具體地，本發明涉及人肺癌小鼠高轉移模型及細胞系的建立。

背景技術

腫瘤轉移是一個多階段、多步驟、多因素、多基因相互作用的極其復雜的過程，自癌細胞從瘤母體脫離到轉移灶形成要經過黏附與解黏附、蛋白酶水解、運動等各種復雜過程和機制。

在惡性腫瘤患者體內，進入淋巴管或血管的瘤細胞可以有很多，但是只有某些瘤細胞亞群得以優勢生長，獲得轉移表型，這些具有高轉移潛能的瘤細胞才易發生轉移。動物實驗也證明：將T241肉瘤細胞移植于C₅₇BL/6小鼠后，24小時在血液中就可查見活的瘤細胞，但到第7天后方出現轉移；將放射性標記的腫瘤細胞注入動物血管中，進入血循環24小時后，能夠存活的瘤細胞僅1％，而最后抵達某一部位產生繼發灶的不到0.1％。

目前，盡管國內外有學者采用篩選的方法成功建立了高轉移模型，例如：Krasagakis等曾經從皮膚神經內分泌細胞癌的淋巴結轉移灶中建立了癌細胞系。Lee等從前列腺癌硬腦膜轉移灶中建立了癌細胞系。Seki等從人肝癌淋巴結轉移灶中建立了一個細胞系。但是，目前少見成功構建理想的人肺癌皮下移植轉移模型的報道。因此，本領域還需要進一步研究開發出人肺癌高轉移模型及細胞系。

發明內容

本發明的目的在于提供人肺癌小鼠高轉移模型及細胞系，以及所述模型或細胞系的用途。

本發明的另一目的還在于提供構建人肺癌小鼠高轉移模型及細胞系的方法。

在本發明的第一方面，提供一種人肺癌高轉移細胞，所述細胞在中國典型培養物保藏中心的保藏號為CCTCC?NO：C200726。

在另一優選例中，該細胞的染色體為近端著絲，異倍體核型，染色體數量為58-72條。

在另一優選例中，該細胞的肺轉移率高于90％。更特別的，該細胞的肺轉移率為100％。

在另一優選例中，該細胞的自然凋亡率低于2％。

在另一優選例中，所述細胞中，黏附相關的基因表達上調；所述的黏附相關的基因選自：CD44v6，CD54，Timp-2。

在本發明的第二方面，提供所述的人肺癌高轉移細胞的用途，用于篩選肺癌轉移相關基因。

在本發明的第三方面，提供一種篩選潛在的肺癌轉移相關基因的方法，所述方法包括步驟：

將所述的人肺癌高轉移細胞中表達的基因與常規肺癌細胞中表達的基因比較，選出人肺癌高轉移細胞中在統計學上表達上調的基因，該基因為潛在的肺癌轉移相關基因。

在另一優選例中，所述方法還包括：

對所獲得的潛在的肺癌轉移相關基因進行進一步的細胞試驗和/或動物試驗，以選出對于肺癌的轉移起確切作用的基因。

在另一優選例中，所述的常規肺癌細胞選自：肺癌低轉移細胞或原發癌細胞。

在另一優選例中，所述的常規肺癌細胞是SPC-A-1細胞。

在本發明的第四方面，提供所述的人肺癌高轉移細胞的用途，用于篩選抗腫瘤轉移藥物；或用于體外腫瘤轉移(優選非治療性的)的研究。

本發明的其它方面由于本文的公開內容，對本領域的技術人員而言是顯而易見的。

附圖說明

圖1A顯示了移植了皮下移植瘤后，小鼠體內產生的肺轉移灶；

圖1B是圖1A的放大顯示。

圖2顯示了肺轉移灶的病理分析，其中，

A.SPC-A-1sci皮下瘤(HE×100)；

B.SPC-A-1皮下瘤(HE×100)；

C.SPC-A-1sci肺轉移灶(HE×100)；

D.SPC-A-1sci肺轉移灶(HE×400)。

圖3顯示了兩個細胞株的細胞形態(光鏡×250)，其中，

A.SPC-A-1sci細胞；

B.SPC-A-1細胞。

圖4顯示了SPC-A-1sci和SPC-A-1兩個細胞株的生長曲線。

圖5顯示了SPC-A-1sci細胞染色體分析的結果。

圖6顯示了兩個細胞株流式細胞術分析的結果，其中，

A.SPC-A-1sci細胞；

B.SPC-A-1細胞。

圖7顯示了兩個細胞株自然凋亡率的流式細胞分析，其中，

A.SPC-A-1sci細胞；

B.SPC-A-1細胞。

圖8顯示了表達上調的與黏附相關的基因(CD44v6，CD54，Timp-2)的免疫組化檢測的結果(×250)。

具體實施方式