[發明專利]甜高粱莖稈汁液制取乙醇及酵母超氧化物歧化酶的方法

無效

• 申請號: 200710047685.5
• 申請日: 2007-11-01
• 公開（公告）號: CN101168747A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 劉榮厚;梅曉巖
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12P7/10
• 分類號: C12P7/10;C12R1/865
• 代理公司: 上海交達專利事務所
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

1.一種甜高粱莖稈汁液制取乙醇及酵母超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：

①將甜高粱莖稈汁液和發酵輔料原液，滅菌、冷卻備用；

②取釀酒酵母逐級擴增培養至每毫升細胞數達到1.0×10⁸個以上；

③在無菌條件下，將甜高粱莖稈汁和發酵輔料混合，接入如②所述的釀酒酵母，進行乙醇發酵；

④乙醇發酵結束后，將發酵液冷凍離心，取上清液進行乙醇蒸餾，收集沉淀菌體，再水洗并離心收集菌體備用；

⑤加入菌體活化液，在水浴中振蕩活化后，破壞酵母菌細胞壁，濕酵母加入磷酸鹽緩沖液，置于水浴中振蕩提取，用離心或抽濾法收集上清液，即為酵母超氧化物歧化酶提取液。

2.根據權利要求1所述的甜高粱莖稈汁液制取乙醇及酵母超氧化物歧化酶的方法，其特征是，所述的甜高粱莖稈汁液總糖含量為12％～18％。

3.根據權利要求1所述的甜高粱莖稈汁液制取乙醇及酵母超氧化物歧化酶的方法，其特征是，所述的發酵輔料分別為(NH)₂SO₄、K₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、Zn(CH₃COO)₂·2H₂O、CuSO₄·5H₂O水溶液。

4.根據權利要求3所述的甜高粱莖稈汁液制取乙醇及酵母超氧化物歧化酶的方法，其特征是，所述的發酵輔料在發酵液中的使用劑量分別為：

(NH)₂SO₄???????????????20-25g·L^-1；

K₂HPO₄?????????????????2.0-2.5g·L^-1；

MgSO₄·7H₂O????????????0.5-0.65g·L^-1；

Zn(CH₃COO)₂·2H₂O??????5.0-6.5mg·L^-1；

CuSO₄·5H₂O????????????12-15mg·L^-1。

5.根據權利要求1所述的甜高粱莖稈汁液制取乙醇及酵母超氧化物歧化酶的方法，其特征是，所述的釀酒酵母接種量為發酵液體積的10％～15％。

6.根據權利要求1所述的甜高粱莖稈汁液制取乙醇及酵母超氧化物歧化酶的方法，其特征是，所述甜高粱莖稈汁和發酵輔料混合后，用6mol·L^-1HCl無菌溶液調整pH值為4.0～5.0。

7.根據權利要求1所述的甜高粱莖稈汁液制取乙醇及酵母超氧化物歧化酶的方法，其特征是，所述進行乙醇發酵，其發酵溫度為30～35℃，且伴有攪拌，攪拌速率為110～150r·min^-1。

8.根據權利要求1所述的甜高粱莖稈汁液制取乙醇及酵母超氧化物歧化酶的方法，其特征是，所述的發酵液冷凍離心，是指：將發酵液于5～7℃，3000～5000r·min^-1離心15min；

所述的水洗菌體、離心收集菌體，是指：用無菌水洗菌體1～2次，3000r·min^-1常溫離心10min收集菌體。

9.根據權利要求1所述的甜高粱莖稈汁液制取乙醇及酵母超氧化物歧化酶的方法，其特征是，所述的菌體活化液組成為，葡萄糖或蔗糖5.0g，酵母膏0.5g，蛋白胨0.5g，K₂HPO₄?0.1g，MgSO₄·7H₂O?0.1g，無菌水100mL；

所述在水浴中振蕩活化，是指：在30℃水浴中120r·min^-1振蕩活化30～60min。

10.根據權利要求1所述的甜高粱莖稈汁液制取乙醇及酵母超氧化物歧化酶的方法，其特征是，所述的磷酸鹽緩沖液，其添加量為：每1g濕酵母加入15mL；

所述的置于水浴中振蕩提取，是指：置于30℃水浴中120r·min^-1條件下振蕩提取5h。