[發(fā)明專利]檢測鼠李糖乳桿菌的遺傳標(biāo)記和方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710046977.7
• 申請(qǐng)日: 2007-10-12
• 公開（公告）號(hào): CN101407835A
• 公開（公告）日: 2009-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李正華;顧瑞霞;陳順利;余哲禮;席文博;沈琴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 統(tǒng)一企業(yè)（中國）投資有限公司;統(tǒng)一企業(yè)(中國)投資有限公司昆山研究開發(fā)中心
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 徐 迅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測或鑒定鼠李糖乳桿菌的方法。

背景技術(shù)

乳酸菌是一類可發(fā)酵碳水化合物、且主要生成乳酸的細(xì)菌的總稱。目前，國際上已對(duì)乳酸菌進(jìn)行大量的研究，并在實(shí)踐上將乳酸菌應(yīng)用于許多領(lǐng)域中。不同種的乳酸菌可起到不同的作用，例如，(1)在細(xì)胞表面形成優(yōu)勢(shì)菌群，對(duì)病原微生物產(chǎn)生抑制作用；(2)菌株分泌抗細(xì)菌物質(zhì)；(3)菌株有助于消化活性；(4)產(chǎn)生抗癌活性物質(zhì)等。

鼠李糖乳桿菌是乳酸菌的一種，目前現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有多種鼠李糖乳桿菌。鼠李糖乳桿菌LV108是本申請(qǐng)人從廣西巴馬瑤族自治縣和新疆和田地區(qū)長壽老人體內(nèi)分離出一株具有優(yōu)異的抗細(xì)菌特性的菌株，其在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏號(hào)為：CGMCC?No.1531，多種試驗(yàn)表明，所述的鼠李糖乳桿菌LV108具有抗幽門螺旋桿菌和大腸桿菌等有害菌的能力以及抗氧化能力，具有耐受低pH值和膽汁酸鹽的能力，并具有很強(qiáng)的消化道黏附能力(參見專利申請(qǐng)CN200510111588.9，公開日為2007年6月20日)，因此該菌株是一株具有極其優(yōu)異的益生功效的鼠李糖乳桿菌。

由于不同種的乳酸菌的益生功效有很大不同，因此有必要對(duì)益生功效良好的菌株加以鑒定。目前現(xiàn)有技術(shù)中的菌株鑒定方法許多還是采用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)方法，或者觀察其培養(yǎng)特征等。然而，傳統(tǒng)的方法操作煩瑣費(fèi)時(shí)，準(zhǔn)確性差，當(dāng)樣品量多時(shí)工作量極大；并且傳統(tǒng)的方法往往局限于區(qū)分親緣關(guān)系遠(yuǎn)的、形態(tài)學(xué)特征差異大的菌株，對(duì)于親緣關(guān)系接近的、遺傳相似度高的菌株常常難以區(qū)分。

因此，本領(lǐng)域需要找到可明確地定性功效良好的特定菌株(如鼠李糖乳桿菌)的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種特異性檢測鼠李糖乳桿菌LV108的遺傳標(biāo)記以及檢測方法。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種引物，所述的引物具有SEQ?ID?NO：19所示的核苷酸序列。

在另一優(yōu)選例中，以鼠李糖乳桿菌LV108基因組DNA為模板，以所述引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中含有650±10bp(優(yōu)選的為約650bp)、500±10bp(優(yōu)選的為約500bp)、和300±10bp(優(yōu)選的為約300bp)的特異性DNA片段。

在本發(fā)明的第二方面，提供一種鑒定鼠李糖乳桿菌LV108的方法，所述方法包括：

以待測菌株的基因組DNA為模板，以SEQ?ID?NO：19所示的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；若擴(kuò)增產(chǎn)物中含有650±10bp、500±10bp、和300±10bp的特異性DNA片段，則該菌株是鼠李糖乳桿菌。

在另一優(yōu)選例中，所述方法進(jìn)一步還包括步驟：

以待測菌株的基因組DNA為模板，以具有SEQ?ID?NO：4所示核苷酸序列的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；若擴(kuò)增產(chǎn)物中含有850±10bp(優(yōu)選的為約850bp)的特異性DNA片段，則該菌株是鼠李糖乳桿菌；和/或

以待測菌株的基因組DNA為模板，以具有SEQ?ID?NO：39所示核苷酸序列的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；若擴(kuò)增產(chǎn)物中含有800±10bp(優(yōu)選的為約800bp)的特異性DNA片段，則該菌株是鼠李糖乳桿菌；和/或

以待測菌株的基因組DNA為模板，以具有SEQ?ID?NO：30所示核苷酸序列的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；若擴(kuò)增產(chǎn)物中含有300±10bp(優(yōu)選的為約300bp)的特異性DNA片段，則該菌株是鼠李糖乳桿菌。

在另一優(yōu)選例中，所述方法進(jìn)一步還包括步驟：

以待測菌株的基因組DNA為模板，以具有SEQ?ID?NO：23所示核苷酸序列的引物和具有SEQ?ID?NO：30所示核苷酸序列的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；若擴(kuò)增產(chǎn)物中含有613±10bp(優(yōu)選的為約613bp)的特異性DNA片段，則該菌株是鼠李糖乳桿菌。

在另一優(yōu)選例中，所述方法進(jìn)一步還包括步驟：

以待測菌株的基因組DNA為模板，以具有SEQ?ID?NO：36所示核苷酸序列的引物和具有SEQ?ID?NO：37所示核苷酸序列的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；若擴(kuò)增產(chǎn)物中含有613±10bp(優(yōu)選的為約613bp)、448±10bp(優(yōu)選的為約448bp)、和150±10bp(優(yōu)選的為約150bp)的特異性DNA片段，則該菌株是鼠李糖乳桿菌。

在另一優(yōu)選例中，通過瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物中的特異性DNA片段。

在另一優(yōu)選例中，所述的待測菌株是乳桿菌。

在另一優(yōu)選例中，所述的待測菌株是鼠李糖乳桿菌。

在本發(fā)明的第三方面，提供一種用于鑒定鼠李糖乳桿菌LV108的試劑盒，所述試劑盒中含有：