[發(fā)明專利]神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白突變體及其用途

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710046358.8
• 申請(qǐng)日: 2007-09-25
• 公開（公告）號(hào): CN101397337A
• 公開（公告）日: 2009-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周明東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海澤生科技開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C12N15/12;A61K38/17;A61P9/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 趙蓉民

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路中EGFR酪氨酸激酶家族中ErbB受體的配體即神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，具體涉及神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白突變體及編碼神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白突變體的核苷酸序列、表達(dá)載體、基因工程菌株及應(yīng)用。

發(fā)明背景

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白(Neuregulin，NRG)是表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)酪氨酸激酶家族[EGFR家族有4個(gè)成員，即ErbB-1(HER1，EGFR)、ErbB-2(HER2，neu)、ErbB-3(HER3)和ErbB-4(HER4)]的一個(gè)重要配體，包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(NRG1)、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(NRG2)、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3(NRG3)、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4(NRG4)。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β為一種跨膜蛋白(Holmes等，Science?256，1205-1210，1992)，膜外部分是N末端，包括免疫球蛋白類似區(qū)(Ig-like?domain)和EGF類似區(qū)(EGF-like?domain)(受體結(jié)合的必需有效部位)，膜內(nèi)部分是C末端。

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白對(duì)心臟的發(fā)育尤其重要(WO?0037095；CN?1276381；WO03099300；WO?9426298；US?6444642；WO?9918976；WO?0064400；Zhao等，J.Biol.Chem.273，10261-10269，1998)。WO?0037095揭示了一定濃度的重組人神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白(rh-neuregulin)可持續(xù)激活ERK信號(hào)通路，促進(jìn)心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)及分化，引導(dǎo)心肌細(xì)胞和細(xì)胞粘連處肌節(jié)和細(xì)胞骨架的重建，改善心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)心肌細(xì)胞的收縮。通過(guò)動(dòng)物模型研究發(fā)現(xiàn)rh-neuregulin可以降低缺血、缺氧、病毒感染等因素對(duì)心肌細(xì)胞的損害程度，修復(fù)受損的心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)，改善心臟的血流動(dòng)力學(xué)；顯著提高模型動(dòng)物的存活率，有效治療各種原因?qū)е碌膭?dòng)物心力衰竭。

NRG1的受體包括ErbB3和ErbB4，NRG1雖不與ErbB2直接結(jié)合，但可誘導(dǎo)ErbB2分別與ErbB3或ErbB4形成ErbB2/ErbB3或ErbB2/ErbB4異源二聚體并進(jìn)一步啟動(dòng)這些受體下游的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。而大量研究證明在心血管系統(tǒng)中ErbB4受體高表達(dá)，在心肌中NRG1介導(dǎo)的ErbB2/ErbB4信號(hào)傳導(dǎo)途徑是維持心臟正常生理功能的重要途徑，而ErbB3卻廣泛表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng)和其它各種組織。因此，NRG1在實(shí)際臨床應(yīng)用中的一個(gè)顧慮是該藥物可能會(huì)通過(guò)激活ErbB2/ErbB3信號(hào)傳導(dǎo)途徑，從而在神經(jīng)系統(tǒng)及其它各種組織中產(chǎn)生副作用。

因此，確有必要改變NRG1的特性，提高NRG1激活ErbB2/ErbB4信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活性，降低其激活ErbB2/ErbB3信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活性，從而在提高其對(duì)心血管組織作用的同時(shí)，降低NRG1在其它系統(tǒng)及組織中產(chǎn)生的副作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的正是提供一種對(duì)心肌細(xì)胞具有高特異性，而對(duì)其它系統(tǒng)或組織具有降低的副作用的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白突變體。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白突變體，其包含神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白EGF類似區(qū)，其特征在于，該突變體是所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的第177-223位氨基酸殘基發(fā)生突變而形成的突變體，且所得突變體對(duì)ErbB2/ErbB4共表達(dá)的細(xì)胞中ErbB受體磷酸化的誘導(dǎo)活性高于神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白，而對(duì)ErbB2/ErbB3共表達(dá)的細(xì)胞中ErbB受體磷酸化的誘導(dǎo)活性低于神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白。

在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白選自神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1，優(yōu)選為神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β，更優(yōu)選神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β1、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β2、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β2類似物或神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β3，最優(yōu)選神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β2。

在另一優(yōu)選例中，所述突變體至少包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β的第177位至229位的氨基酸序列，優(yōu)選包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β的第177位至237位的氨基酸片段，上述位點(diǎn)均從神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的N端起計(jì)算。

在另一優(yōu)選例中，所述突變體優(yōu)選包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β2的第177位至237位的氨基酸片段，上述位點(diǎn)均從神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的N端起計(jì)算。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的第223位氨基酸殘基N突變?yōu)榉荖的其它氨基酸殘基。

在另一優(yōu)選例中，所述神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的第223位氨基酸殘基對(duì)應(yīng)于重組人神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白的47位。

在另一優(yōu)選例中，所述的非N的其它氨基酸殘基選自：R和K。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，所述突變體的氨基酸序列中包括SEQ?ID?NO：2或SEQ?ID?NO：4所示的序列。