[發(fā)明專利]Phi BT1－TAT－NLS－HIS6整合酶及其制備方法與應(yīng)用,其多克隆抗體及其應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710046170.3
• 申請(qǐng)日: 2007-09-20
• 公開（公告）號(hào): CN101157906A
• 公開（公告）日: 2008-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳金中;田聆;姚紀(jì)花;丁曉明;趙國屏;薛京倫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N9/00;C12N15/66;C07K16/40;G01N33/53;G01N33/573
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛;盛志范

1.一種表達(dá)重組Phi?BT1-TAT-NLS-HIS6整合酶蛋白的方法，其特征在于具體步驟：

使用大腸桿菌表達(dá)Phi?BT1-TAT-NLS-HIS6整合酶蛋白并用NTA樹脂純化PhiBT1-TAT-NLS-HIS6整合酶蛋白，利用基于PCR引物末端修飾的技術(shù)，通過多輪PCR操作在Phi?BT1整合酶表達(dá)框架3`附加表達(dá)編碼-TAT-NLS-HIS6的序列，從而形成PhiBT1-TAT-NLS-HIS6整合酶標(biāo)大框架，將其克隆到原核表達(dá)載體pET22b(+)上，經(jīng)測(cè)序鑒定正確后，轉(zhuǎn)化到BL21菌株中，進(jìn)行大量誘導(dǎo)表達(dá)和純化；條件為：誘導(dǎo)溫度15-25℃，時(shí)間12-24小時(shí)，采用含咪唑的高鹽緩沖液梯度洗脫收集純化蛋白。

2.一種重組Phi?BT1-TAT-NLS-HIS6整合酶蛋白，由權(quán)利要求1所述方法表達(dá)。

3.一種如權(quán)利要求2所述重組Phi?BT1-TAT-NLS-HIS6整合酶蛋白的的應(yīng)用，其特征在于該項(xiàng)蛋白在體外用于介導(dǎo)兩個(gè)含有Phi?BT1特異性的分子之間的DNA片段之間的互換，實(shí)現(xiàn)體外常規(guī)基因操作；或者Phi?BT1-TAT-NLS-HIS6蛋白與含有Phi?BT1特異性att序列的基因片段共同轉(zhuǎn)染細(xì)胞，并且介導(dǎo)該外源基因整合到宿主染色體DNA。

4.一種Phi?BT1-TAT-NLS-HIS6蛋白多克隆抗體，由下述方法獲得：

利用原核表達(dá)的噬菌體Phi?BT1-TAT-NLS-HIS6整合酶蛋白，與福氏佐劑混合免疫新西蘭大白兔，第一次Phi?BT1-TAT-NLS-HIS6整合酶蛋白與完全福氏佐劑混合免疫，然后每1-2周用Phi?BT1-TAT-NLS-HIS6整合酶蛋白與不完全福氏佐劑強(qiáng)化免疫，最后常規(guī)放血植被血清，該血清為用蛋白A-Sepharose從抗體陽性的家兔血清中分離總IgG即為制備的抗Phi?BT1-TAT-NLS-HIS6整合酶的多克隆抗體。

5.如權(quán)利要求4所述的多克隆抗體在特異性識(shí)別Phi?BT1整合酶蛋白質(zhì)的應(yīng)用。