[發明專利]一種測定人血漿中苯妥英及其前體藥物和代謝物的方法

無效

• 申請號: 200710044799.4
• 申請日: 2007-08-10
• 公開（公告）號: CN101105479A
• 公開（公告）日: 2008-01-16
• 發明（設計）人: 馬春來;焦正;趙倩華;洪震
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74;G01N21/33
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬醫學檢驗領域，涉及體內藥物的分析測定方法，具體涉及一種測定人血漿中磷苯妥英、苯妥英及其代謝產物4′-羥苯妥英的方法。

背景技術

苯妥英(phenytoin，PHT)是治療急性癲癇發作或癲癇持續狀態的高效藥物。因其水溶性差、和堿性強，使其使用價值受到影響。新近研究開發的非胃腸道給藥的抗癲癇藥物(antiepileptic?drugs，AEDs)磷苯妥英(fosphenytoin，FOS)是PHT的磷酸酯前藥。由于其高極性和適宜的pH，可以通過靜脈滴注或肌肉注射給藥。FOS本身沒有明顯的藥理活性，給藥后經血液和組織中的磷酸酯酶代謝為苯妥英后發揮抗癲癇作用。苯妥英主要通過4′-羥化代謝成4′-羥苯妥英(4′-hydroxyphenytoin，4′-HPPH)，進而生成葡萄糖醛酸化物排出體外。FOS對免疫學方法測定PHT有干擾，常使PHT測定值高于實際濃度。目前國內外尚未見關于同時測定人血漿中FOS、PHT和4′-HPPH的濃度的相關報道。因此研究開發高效、靈敏、準確的檢測血漿中上述藥物濃度的方法，對用以調整給藥劑量，保證用藥安全、有效具有重要臨實踐意義。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的缺陷，提供一種簡便、快速、靈敏、可同時測定體內磷苯妥英(fosphenytoin，FOS)、苯妥英(phenytoin，PHT)和4′-羥苯妥英(4′-hydroxyphenytoin，4′-HPPH)血藥濃度的方法。

本方法無需昂貴的設備和試劑，具有操作簡便、快速、血漿用量少、成本低等優點，適合常規血藥濃度監測。

本方法的技術方案是：待測樣品預處理后，經酸性流動相在色譜柱分離，用紫外檢測器檢測。

包括下述步驟：

1)樣品預處理

取待測樣品，經磷酸酸化后，加入定量的有機溶媒進行萃取、離心后，取上層有機層溶液氮氣吹干、流動相復溶，取上清液進樣；

所述的磷酸酸化溶液為20～-40％磷酸溶液，所述的有機溶媒為乙酸乙酯溶液；

2)樣品分離

采用通用型的液相色譜柱，其填料為Agilent?RX-C₈，高效液相系統采用通用型紫外檢測器以及高壓泵，流動相為酸性，等度洗脫；

所述的流動相采用0.08～0.1％三氟乙酸(TFA)水溶液(pH＝2.1～2.5)、乙腈和甲醇的混合液；

所述的等度洗脫模式優選0.08～0.1％TFA水溶液∶乙腈∶甲醇為60∶17∶23，V/V/V；

3)樣品檢測

采用通用型紫外檢測器檢測FOS、PHT和4′-HPPH的峰面積，紫外檢測波長為210±1nm，用標準曲線方程換算成濃度。

本方法具有以下優點：

1.采樣量少：測定一份樣品只需0.1ml血漿樣本；

2.預處理簡便：一步乙酸乙酯萃取，簡便易行，適用于常規檢測；

3.選擇性強：內源性物質、常用抗癲癇藥物和非處方藥物對測定不干擾；

4.測定時間短：整個色譜分析測定過程僅為12min。

所述FOS、PHT和4′-HPPH測定的線性范圍分別為1～400、0.5～50和0.5～10mg·L^-1，方法回收率均在100±12％，日內和日間的精密度(相對標準差，RSD)均小于11％。

本發明方法快速準確、操作簡便、成本低，適合臨床常規監測，對用以調整給藥劑量，保證用藥安全并有效，具有重要臨實踐意義。

附圖說明

圖1：空白血漿色譜圖

圖2：靜脈注射磷苯妥英18mg/kg受試者0.5h的色譜圖，

其中，1：4′-羥苯妥英(濃度為2.87mg·L^-1)；2：磷苯妥英(濃度為44.8mg·L^-1)；3：內標(鹽酸普萘洛爾)；4：苯妥英(濃度為16.2mg·L^-1)。

圖3：靜脈注射磷苯妥英16mg/kg受試者0.5h的色譜圖，

其中，1：4′-羥苯妥英(濃度為3.23mg·L^-1)；2：磷苯妥英(濃度為39.8mg·L^-1)；3：內標(鹽酸普萘洛爾)；4：苯妥英(濃度為18.7mg·L^-1)。

具體實施方式

實施例1：

色譜條件