[發明專利]定量測定人體丙氨酸氨基轉移酶的干化學試紙

無效

• 申請號: 200710044719.5
• 申請日: 2007-08-09
• 公開（公告）號: CN101105491A
• 公開（公告）日: 2008-01-16
• 發明（設計）人: 田漪;王縵;朱世成
• 申請（專利權）人: 上海科華生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N21/78;C12Q1/52
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛;盛志范

技術領域

本發明屬于體外臨床診斷試劑技術領域，具體涉及一種適用于測定人體全血、血清或血漿等中的丙氨酸氨基轉移酶、門冬氨酸氨基轉移酶等生化指標的干化學試紙。

技術背景

丙氨酸氨基轉移酶又稱谷丙轉氨酶，它催化L-丙氨酸和L-谷氨酸之間氨基的轉移。丙氨酸氨基轉移酶主要存在于肝細胞的胞漿中，在心肌、骨骼肌及其它組織中的含量較低。丙氨酸氨基轉移酶是肝臟的特異性酶，血清值升高表明肝細胞質膜存在滲漏并退化，其升高的程度與受累細胞的數量有關。

臨床上測定丙氨酸氨基轉移酶的試劑可分為液體試劑和干化學試紙兩類。干化學試紙主要用于快速檢測。同液體試劑相比，干化學試紙具有方便、靈活、污染小、操作簡便等優點。

目前，檢測丙氨酸氨基轉移酶的的干化學試紙多為國外產品，主要有縱向和橫向兩類。第一類是以強生公司和富士公司為代表的多層膜干片法，利用感光膠片的涂層技術將試劑層、輔助試劑層、光漫射層和分布層等試劑涂布在透明支持層上，從支持層的反面測定光密度的變化。如專利：U.S.PAT.NO.5,508,173。第二類是羅氏公司的干化學產品，U.S.PAT.NO.4,604,264將試劑涂布在多絲的纖維或織物上，全血通過玻璃纖維橫向過濾后與上試劑層接觸反應，通過上部覆蓋的一透明薄膜測定光密度的變化。

上述這些產品，有的生產工藝復雜，需要專門的技術；有的可能存在某些缺陷，如加樣和測定在同一側可能會造成干擾。而且目前應用的干式生化分析儀為大中型設備，它將若干個生化項目集中在一臺儀器上測定。在測定單一的丙氨酸氨基轉移酶項目時，如流動采血車等場合，其功能和速度會受到限制。本發明旨在提供獨立的小型機和試紙，更適合丙氨酸氨基轉移酶的大規模快速篩查。

發明內容

本發明的目的在于提供一種使用方便、快速的定量測定人體全血、血清或血漿中的丙氨酸氨基轉移酶的干化學試紙。

本發明提供的定量測定丙氨酸氨基轉移酶的干化學試紙，為長條形，一端為手持區，另一端為測試區，其結構如圖1和圖2所示。它由上支持層1、下支持層2、底物層5和顯色層6組成。其中，上支持層1和下支持層2通過自帶的膠層粘合在一起。在上支持層1的測試區開有加樣孔3，下支持層2的對應位置開有測試孔4。底物層5和顯色層6迭合，位于加樣孔和測試孔處的上支持層1和下支持層2之間。

本發明中，上支持層1和下支持層2可采用高分子聚合材料，如聚乙烯、聚氯乙烯、聚苯乙烯或聚酯纖維等。其中優選聚酯纖維。單片支持層的厚度為100-250μm，大小為6×50mm-12×80mm。上下支持層上的加樣孔和測試孔為圓形，直徑相同，為4-8mm。加樣孔3用于滴加樣品，測試孔4用于觀察和測定反應區顏色的變化。

本發明中，底物層5用來接受樣品，樣品在底物層擴散，將浸漬在底物層上的試劑溶解，樣品中的可檢測部分被轉運到顯色層的樣品面。底物層5優選反應區面積能容納大約10-30μl血液，并能將大約6-10μl樣品轉運至顯色層的材料。適合做底物層的材料包括玻璃纖維、各種濾紙或無紡布等，特別優選玻璃纖維，其結構疏松，血液樣品中的可檢測部分和試劑能快速滲透至顯色層，縮短了反應時間。

本發明中，顯色層6為浸漬有檢測試劑和色原的各種濾紙、無紡布或合成膜等，優選聚砜、聚醚砜或尼龍等材料的合成膜，特別優選具有孔徑大小呈梯度變化的孔的合成膜，合成膜上的小孔孔徑范圍為0.2-10μm。合成膜有一個用于點樣的樣品面，和一個可觀察到顏色變化的檢測面。當血液滲透到膜的大孔面上后，樣品逐漸穿過膜，流過的孔徑越來越小。最后，紅細胞等物質到達膜的某個位置就不再往下滲透。含有丙氨酸氨基轉移酶的剩余樣品滲透到小孔面，通過一系列反應，使色原顏色發生變化，從而指示樣品中丙氨酸氨基轉移酶的濃度。

本發明中，反應試劑分布于底物層和顯色層上。定量全血或血清/血漿滴加于加樣孔內，樣品均勻分布并滲入試劑層中。樣品中的丙氨酸氨基轉移酶(ALT)催化底物L-丙氨酸和α-酮戊二酸鈉，產生L-谷氨酸和丙酮酸。丙酮酸被丙酮酸氧化酶在黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)及硫胺素焦磷酸(TPP)存在下氧化產生過氧化氫。在過氧化物酶作用下，過氧化氫氧化無色色原生成有色產物，顏色變化與樣品中的丙氨酸氨基轉移酶活性成正比，用反射光度計可測定之。