[發明專利]肥厚型心肌病的PRKAG2基因突變及其檢測方法

無效

• 申請號: 200710044496.2
• 申請日: 2007-08-02
• 公開（公告）號: CN101134961A
• 公開（公告）日: 2008-03-05
• 發明（設計）人: 鄭興;張靜;黃薇;王瑩;王洪如
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學;上海人類基因組研究中心
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/68
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所
• 代理人: 黃志達;謝文凱

1.一種肥厚型心肌病的PRKAG2基因突變，其特征在于：PRKAG2基因第3外顯子上第298位堿基發生G→A雜合突變。

2.根據權利要求1所述的肥厚型心肌病的PRKAG2基因突變，其特征在于：該突變導致編碼的第100位氨基酸發生由甘氨酸(G)到絲氨酸(S)的錯義突變。

3.肥厚型心肌病的PRKAG2基因突變檢測方法，包括下列步驟：

(1)提取外周血DNA；

(2)PRKAG2基因外顯子的體外PCR擴增；

(3)DNA測序分析。

4.根據權利要求3所述的肥厚型心肌病的PRKAG2基因突變檢測方法，其特征在于：所述的PCR擴增是指反應液為2μL?10×PCR?Buffer、0.3μl的20μM引物、0.6μl0mM?dNTP?mix、1.2μL?25mM?MgCl₂、1U?Taq酶，加ddH₂O至20μl，20ng/μl?DNA模板1μl，反應條件：95℃15分鐘；94℃40秒，63℃1分鐘，每個循環減0.5℃，72℃延伸，共10個循環；然后變性94℃40秒，退火57℃?1分鐘，延伸72℃，共30個循環；72℃延伸10分鐘。

5.根據權利要求3所述的肥厚型心肌病的PRKAG2基因突變檢測方法，其特征在于：所述的測序反應中的PCR反應體系包括測序引物、PCR純化產物和熒光測序MIX，反應條件：94℃?10秒預變性，94℃?10秒，63℃5秒，68℃4分鐘，35個循環，56℃延伸4分鐘。

6.根據權利要求3所述的肥厚型心肌病的PRKAG2基因突變檢測方法，其特征在于：所述的PRKAG2基因外顯子的PCR和測序引物序列見表1。

表1?PRKAG2基因外顯子PCR和測序引物序列

????外顯子????引物序列(5’→3’)????產物大小(bp)?????1??????2??????3??????4??????5???Forward???Reverse??Forward???Reverse??Forward???Reverse??Forward???Reverse??Forward???Reverse????tgatttgcctacgagggttc?????cgggcagagagagagattga????aaacacgtccacatcccttc?????aggtgagctgtcgcaggat????ggtgctacctgcagaccatt?????ctggaccagaaggattacgc????cctctgaccacctccaatgt?????tctccctcagcctgtgattt????aagcgagaaaggatccccta?????agttcggcgagtaaggacaa?????539??????373??????700??????559??????926?

?????6??????7??????8??????9??????10??????11??????12，??13??????14??????15??????16?????Forward?????Reverse????Forward?????Reverse????Forward?????Reverse????Forward?????Reverse????Forward?????Reverse????Forward?????Reverse????Forward?????Reverse????Forward?????Reverse????Forward?????Reverse????Forward?????Reverse????ctggcccttgatcatactgg?????gaattcagataaaacctcagcaca????gaatcaattgagcccaggaa?????caccctgccagcaagaat????gccaaattctctggttagttcc?????tgtactgaagttccctgcatgt????cccaccttgatctcccaaa?????gcctgctgaaggtgtcctat????tcttcaaatgcaacatcctga?????atccatccttagcaccagca????tgtagcttgcacttgtatttgaga?????agagaatgccgagttttgttg????tgttaattcaggcatccaggt?????tggttgctaaaccaatgcag????acagtagcaatggcatgtcg?????gttctgggacaggagggaat????gcaatcctcccaccaagtaa?????tcctcactcacgcagaacac????ctgctccttcccacatcg?????aagctcggtgttgtttcaca?????391??????377??????474??????449??????467??????580??????874??????468??????491??????600?