[發明專利]以鏈親和素為載體的短肽融合表達熱誘導重組質粒及其制備方法

無效

• 申請號: 200710043264.5
• 申請日: 2007-06-29
• 公開（公告）號: CN101121752A
• 公開（公告）日: 2008-02-13
• 發明（設計）人: 徐萬祥;季朝能;顧少華;何亞萍;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海市計劃生育科學研究所;復旦大學;上海科學院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;G01N33/68;C12N15/62
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 徐迅

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，更具體地涉及采用鏈親和素(Stv)核心蛋白作為目的短肽(6-20肽，如8肽或18肽)生物合成載體，可專供抗原表位掃描鑒定用的原核生物熱誘導Stv重組表達質粒(如pXXStv-1和pXXStv-2)及其制備方法。

背景技術

眾所周知，就探究一個新蛋白的功能，特別是研制靶抗原合成肽疫苗而言，掃描鑒定它的線性B-細胞表位(B-cell?epitope，BCE)始終是非常重要的研究內容。

最早最經典的抗原表位鑒定方法是始于1963年的固相肽化學合成法，但這一技術過于繁瑣，一直未能獲得廣泛應用。八十年代中先后發展了聚苯乙烯針(polypropylene?pin)多肽合成技術(Gensen?HM，et?al.：Use?of?peptide?synthesis?toprobe?viral?antigens?for?epitopes?to?a?resolution?of?a?single?acid.Proc?Natl?Acad?SciUSA，81：3998-4002，1984)和聚苯乙烯網袋(polypropylene?mesh?bag)合成技術(Houghten?RA.：General?method?for?the?the?rapid?solid-phase?synthesis?of?largenumbers?of?peptides：Specificith?of?antigen-antibody?interaction?at?the?level?ofindividual?amino?acids.Proc?Natl?Acad?Sci?USA，82：5131-5135，1985)，從而促進了連續且部分重疊的肽探針BCE掃描法的應用。這二項重要技術的特點是針洗滌完全，可反復使用，而且能直接轉入酶標板中進行ELISA檢測，或大大簡化肽合成過程，因而在抗原表位掃描鑒定中相對應用較多。但由于氨基酸殘基合成費用高，檢測技術要求高且需要特殊儀器設備，因而限制了其廣泛應用。隨著分子生物學技術的進步，八十年代中期也建立了基因亞克隆表位鑒定法(Mehra?V，et?al.：Efficient?mapping?of?protein?antigenic?determinants.Proc?NatlAcad?Sci?USA，83：7013-7017，1986)。該方法的要點是：將靶基因用DNA酶隨機切割成200～1,000堿基大小不等的片段，并將它們亞克隆重組插入λgt11表達載體，然后用特異的單抗篩選免疫反應陽性的克隆，并進行DNA測序，最后依據那些插入片段共有的核苷酸序列推斷出該單抗識別的BCE基序。因為酶切條件不易控制，或者說不易獲得足以比較推斷的BCE基序的不同長度片段亞克隆，所以應用該方法成功鑒定出靶BCE的報道屈指可數。

至于表位掃描鑒定原理與化學合成肽法和基因亞克隆法相似的化學合成肽庫法(Jung?G?and?Beck-Sickinger?AG：Multiple?peptide?synthesis?methodsand?their?applications.Angew?Chem?Int?Ed?Engl，31：367-486，1992；GeysenHM?and?Mason?TJ：Screening?chemically?synthesized?peptide?libraries?forbiologically-relevant?molecules.Bioorg?Med?Chem?Lett.3：397-404，1993)和基因工程肽庫法或稱噬菌體表位展示文庫法(Scott?JK?and?Smith?GP：Searching?for?peptide?ligands?with?an?epitope?library.Science，249：386-390，1990)，很顯然，它們的應用也存在很大的局限性，因為建庫工作量大和表位篩選麻煩，特別是建庫成本高，常規實驗室的靶抗原表位掃描鑒定不適宜采用此類方法，除非所需篩選鑒定的抗原特別重要特別有意義。