[發明專利]一種生物堿的分析方法

無效

• 申請號: 200710042947.9
• 申請日: 2007-06-28
• 公開（公告）號: CN101334374A
• 公開（公告）日: 2008-12-31
• 發明（設計）人: 閻超;李鵬;黃曉晶;黎路;申克宇
• 申請（專利權）人: 上海通微分析技術有限公司
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司
• 代理人: 楊元焱

技術領域

本發明涉及物質的分析方法，尤其涉及一種生物堿的分析方法。

背景技術

生物堿包括咖啡因、可可堿和茶堿，是茶葉及可樂等軟飲料中常見的成分，由于許多生物堿有興奮甚至制幻作用，其含量需要進行嚴格控制。傳統的毛細管電泳分離方法，由于受到壓力進樣和落差進樣等傳統進樣方式的限制，其定量重現性無法滿足質量控制的需要。

高精度定量毛細管電泳儀是一種新型的微量分析儀器，它采用壓力和電滲流驅動電解質溶液通過毛細管柱。樣品以溶液狀態進入毛細管柱，不同組份在高壓電場的作用下，以不同的速度定向遷移，先后依次通過紫外檢測器進行檢測，根據各組分的遷移時間和響應值進行定性、定量分析。電泳的支持物是石英毛細管，采用納升級定量進樣閥，可實現高精度定量進樣。

發明內容

本發明的目的就是為了解決上述現有技術存在的問題，提供一種高精度定量毛細管電泳儀的生物堿的分析方法。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：一種生物堿的分析方法，采用高精度定量毛細管電泳儀分析，所述的高精度定量毛細管電泳儀包含高精度微流液體輸送泵、微流控制裝置、進樣閥、高壓電源、電場隔離裝置和紫外檢測器，所述的生物堿的分析方法包括以下步驟：

A、制備樣品溶液

準確稱取咖啡因、可可堿和茶堿標準品各10mg，置于100ml容量瓶中，用5mM硼砂溶液溶解并稀釋至刻度，作為樣品溶液；

B、儀器準備

將高精度定量毛細管電泳儀各部分連接好，檢查是否漏液，保證儀器的密閉性；打開紫外檢測器電源，預熱30min；打開高精度微流液體輸送泵、高壓電源和微流控制裝置，調節電壓為10kV，泵流速為0.05ml/min；

C、進樣分析

從進樣閥注入樣品溶液進行分析，并采集圖譜；

D、連續進樣分析7次，記錄保留時間和積分面積，并計算相對標準偏差。

步驟C中所述的進樣分析的分析條件為：

毛細管柱：內徑150μm，柱長70cm，有效柱長35cm；

流動相：5mM硼砂緩沖溶液；

檢測波長：254nm。

本發明生物堿的分析方法由于采用高精度定量毛細管電泳儀進行分析，解決了傳統毛細管電泳定量差的固有缺陷，三種生物堿達到基線分離，定性重現性RSD₇＜0.5％，定量重現性RSD₇＜1％。

附圖說明

圖1是本發明的分析方法所采用的高精度定量毛細管電泳儀的結構原理圖；

圖2是采用本發明的分析方法得到生物堿的圖譜。

具體實施方式

本發明生物堿的分析方法，采用高精度定量毛細管電泳儀分析，這種高精度定量毛細管電泳儀的主要結構如圖1所示，它包括流動相貯液瓶1和2、連接管3、高精度微流液體輸送泵4和5、混合閥6、微流控制裝置7、電場隔離裝置8、定量進樣閥9、高壓電源10、分離毛細管11、紫外檢測器12、高壓導線13、高壓電極14、三通15、連接管16和廢液收集瓶17。

本發明生物堿的分析方法的步驟是：首先以咖啡因、可可堿和茶堿標準品為樣品，制備出它們的混合溶液。分別準確稱取咖啡因、可可堿和茶堿各10mg，置于100ml容量瓶中，用5mM硼砂溶液(pH9.0)溶解并稀釋至刻度，作為樣品溶液。在該樣品溶液中，咖啡因、可可堿和茶堿的濃度均為1.0×10^-4g/ml。

將高精度定量毛細管電泳儀各部分連接好，檢查是否漏液，保證儀器的密閉性。接著打開紫外檢測器電源，預熱30min；打開高精度微流液體輸送泵，控制泵流速為0.05ml/min，開始輸送流動相；打開高壓電源，調節電壓為10kV，并打開微流控制裝置，控制流動相的流量和流速，至紫外檢測器檢測出流動相的穩定基線。然后從定量進樣閥注入樣品溶液進行分析。分析條件為：毛細管柱：內徑150μm，柱長100cm，有效柱長60cm；流動相：10mM硼砂緩沖溶液；檢測波長：254nm。采集三種生物堿的圖譜，如圖2所示。圖2中17.12為咖啡因的譜峰，18.27為可可堿的譜峰，26.01為茶堿的譜峰。

為了證明本方法的效果，按照上述方法連續進樣分析7次，分別記錄保留時間和積分面積，并計算相對標準偏差RSD。實驗結果表明，三種生物堿達到基線分離，定性重現性RSD₇＜0.5％，定量重現性RSD₇＜1％。