[發明專利]金黃色葡萄球菌 DNA 疫苗pcDN A3.1(+)－Minigene及其制備方法

有效

• 申請號: 200710041163.4
• 申請日: 2007-05-24
• 公開（公告）號: CN101066463A
• 公開（公告）日: 2007-11-07
• 發明（設計）人: 陳宇光;倪繼祖;沈彥萍
• 申請（專利權）人: 上海大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P31/04
• 代理公司: 上海上大專利事務所
• 代理人: 何文欣

1.一種金黃色葡萄球菌DNA疫苗pcDNA3.1(+)-Minigene，其特征在于該疫苗是以真核表達載體pcDNA3.1(+)為載體，融合了Minigene基因即FnBP的抗原決定簇D1和D3以及TRAP的抗原決定簇的基因，該Minigene基因用Nhe?I和Kpn?I雙酶切后插入真核表達載體pcDNA3.1(+)的Nhe?I/Kpn?I之間；該Minigene基因的堿基序列為SEQ?NO?5所示。

2.根據權利要求1所述的金黃色葡萄球菌DNA疫苗pcDNA3.1(+)-Minigene的編碼Minigene蛋白，其特征在于該Minigene的氨基酸序列為SEQ?NO?6所示。

3.一種根據權利要求1所述的金黃色葡萄球菌DNA疫苗pcDNA3.1(+)-Minigene的制備方法，其特征在于該方法具有以下步驟：

a.Minigene的人工合成：根據，FnBP的配體結合基序和TRAP蛋白C末端的12個氨基酸的基因序列，設計重組融合基因的序列如下：

CAAGGTGGCAATATCGTAGATATCGATTTTGATAGTGTACCTCAATTCGGTGGACACAATAGTGTTGACTTTGAAGAAGATACAAGTTATTTTGAAAGATATCTATACCCAATAAAAGAA；

再根據上段基因設計上下游引物：

上游引物：

5’-CAAGGTGGCAATATCGTAGATATCGATTTTGATAGTGTACCTCAATTCGGTGGACACAATAGTGTTGACT-3’

下游引物：

5’-TTCTTTTATTGGGTATAGATATCTTTCAAAATAACTTGTATCTTCTTCAAAGTCAACACTATTGTGTCCA-3’

上述引物互為模板進行PCR擴增，得到120bp的Minigene片段，回收純化擴增產物；

b.重組質粒pcDNA3.1(+)-Minigene的構建：根據Minigene末端20個核苷酸序列設計上下游引物：

上游引物：5’-TAAGCTAGCACCATGGGTCAAGGTGGCAATATCGTAGA-3’

下游引物：5’-GCCGGTACCTTATCATTCTTTTATTGGGTATAGAT-3’

以步驟a所得Minigene片段作為模板進行PCR，擴增得到的片段用Nhe?I和Kpn?I雙酶切后插入質粒pcDNA3.1(+)的Nhe?I/Kpn?I之間，構成重組質粒pcDNA3.1(+)-Minigene。

4.根據權利要求1所述的金黃色葡萄球菌DNA疫苗pcDNA3.1(+)-Minigene在制備預防金黃色葡萄球菌感染引起的各種疾病疫苗中的應用。