[發(fā)明專利]誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710041031.1
• 申請(qǐng)日: 2007-05-22
• 公開（公告）號(hào): CN101066040A
• 公開（公告）日: 2007-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林煜;章振華;張承妹;王凌健;蘇敏;宋學(xué)孟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海光兆植物速生技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 上海東亞專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 董梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，尤其是NL895品種的胚性細(xì)胞發(fā)生方法，包括其激素水平及培養(yǎng)日令的選擇。

背景技術(shù)

NL895是黑楊派楊樹品種，具有速生、優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、樹干通直圓滿、尖削度小、樹皮薄、單板出材率高及濕心材含量低等優(yōu)點(diǎn)，不同立地條件下，平均7年生材積生長(zhǎng)量超過對(duì)照24.22％～53.22％，木材密度提高3.2％～5％，單板出材率提高12.4％～15.0％，濕心材含量低的無性系比對(duì)照降低15.0％～16.0％。其次，還具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和遺傳穩(wěn)定性，在黃淮地區(qū)花斑鹽堿地上生長(zhǎng)良好，材積生長(zhǎng)量可超過對(duì)照92.44％～138.68％。抗蟲抗病性較強(qiáng)，尤其對(duì)蛀干害蟲和葉部病害表現(xiàn)較強(qiáng)抗性。適種黃淮、江淮及長(zhǎng)江中下游的廣大平原地區(qū)。

黑楊派楊樹為木本植物，因個(gè)體大存在不易處理和不易大量處理的困難，如何快速組織培養(yǎng)是科學(xué)界關(guān)注的熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹(NL895)胚性細(xì)胞發(fā)生方法，為NL895胚性細(xì)胞的培育提供重要參考資料。

本發(fā)明目的通過下述方法方案實(shí)現(xiàn)：一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，選取NL895優(yōu)質(zhì)組培苗切成0.1～0.2cm的小段作為外植體，接種于脫分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其中，脫分化培養(yǎng)基為：MS+KT0.1-0.4mg/L+2，4-D0.1-0.6mg/L，使外植體器官脫分化，形成愈傷組織，然后，對(duì)愈傷組織進(jìn)行再分化培養(yǎng)。

所述的脫分化培養(yǎng)72～144小時(shí)，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時(shí)間為12～14小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為2000～3000lux。

所述的再分化培養(yǎng)基為：MS+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。

所述的再分化培養(yǎng)時(shí)間為72～120小時(shí)，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時(shí)間為12～14小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為2000～3000lux。

利用誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，培育出大量黑楊派楊樹(NL895)胚性細(xì)胞，從而通過誘變獲得變異體。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：

通過培養(yǎng)基培養(yǎng)，克服了林木生活周期長(zhǎng)，個(gè)體大的劣勢(shì)，獲得大量的，具有細(xì)胞全能性的NL895胚性細(xì)胞，為NL895誘變育種中篩選耐鹽堿、耐旱、抗病、高產(chǎn)等優(yōu)良突變體提供了重要技術(shù)前提。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，選取南林895(NL895/2000)(P.×Euroamericana?CL“NL895”)優(yōu)質(zhì)組培苗切成0.1～0.2cm的小段作為外植體，接種于脫分化培養(yǎng)基，即MS+KT0.2mg/L+2，4-D?0.2mg/L中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時(shí)間為12～14小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為2000～3000lux，使外植體器官脫分化，形成愈傷組織。

培養(yǎng)72～144小時(shí)后，將愈傷組織轉(zhuǎn)移至再分化培養(yǎng)基，即MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L中進(jìn)行再分化培養(yǎng)，培養(yǎng)72～120小時(shí)，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時(shí)間為12～14小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為2000～3000lux。此時(shí)為胚性細(xì)胞發(fā)生率最高，為50～80％。

利用該誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，培育出大量黑楊派楊樹(NL895)胚性細(xì)胞，從而通過誘變獲得變異體。

實(shí)施例2

一種誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，選取南林895(NL895/2000)(P.×Euroamericana?CL“NL895”)優(yōu)質(zhì)組培苗切成0.1～0.2cm的小段作為外植體，接種于脫分化培養(yǎng)基，即MS+KT?0.1mg/L+2，4-D0.6mg/L中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時(shí)間為12～14小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為2000～3000lux，使外植體器官脫分化，形成愈傷組織。

培養(yǎng)72～144小時(shí)后，將愈傷組織轉(zhuǎn)移至再分化培養(yǎng)基，即MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.3mg/L中進(jìn)行再分化培養(yǎng)，培養(yǎng)72～120小時(shí)，培養(yǎng)溫度為22～26℃，光照時(shí)間為12～14小時(shí)/天，光照強(qiáng)度為2000～3000lux。此時(shí)為胚性細(xì)胞發(fā)生率最高，為50～80％。利用該誘導(dǎo)黑楊派楊樹胚性細(xì)胞發(fā)生方法，培育出大量黑楊派楊樹(NL895)胚性細(xì)胞，從而通過誘變獲得變異體。

實(shí)施例3