[發明專利]一種新的重組融合分子及其抗腫瘤治療作用

有效

• 申請號: 200710040524.3
• 申請日: 2007-05-11
• 公開（公告）號: CN101302256A
• 公開（公告）日: 2008-11-12
• 發明（設計）人: 殷正豐;李瑾;溫瑩浩;康曉燕;施樂華
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K38/16;A61P35/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 徐迅

技術領域

本發明涉及DNA重組技術和藥物領域。更具體地，本發明涉及人Bcl-2相關X蛋白(Bcl-2 associated?X?protein，以下簡稱Bax蛋白)與人白介素-24(以下簡稱IL-24)的融合蛋白，編碼 該融合蛋白的DNA序列，含該DNA序列的載體，含該載體的宿主細胞，用基因工程制備該融 合蛋白的方法，以及該融合蛋白在如腫瘤等疾病治療中的應用。

背景技術

隨著單克隆抗體技術和重組DNA技術的發展，已經發現了許多細胞特異性表面分子。并且， 根據這些分子的差異表達譜，已經重組了一些由靶向性分子和毒素分子融合而成的免疫毒素或 細胞毒素。

靶向性分子通常為完整的抗體或抗原結合性結構域，包括抗體的Fv段(免疫毒素)或生長 因子和細胞因子(細胞毒素)，而毒素分子則為細菌或植物毒素的突變體。

目前應用得較多的是假單胞菌外毒素A(PE)和白喉毒素(diphtheria?toxin，DT)。由于細 胞對細胞表面的抗原-抗體復合物或配體-受體復合物能夠快速內在化，以及單個內在化毒素分 子可以導致細胞死亡，因此重組毒素可選擇性靶向和殺傷導向分子針對的有害靶細胞，包括癌 細胞以及與免疫系統紊亂有關的細胞。

目前在國際上，已有幾個重組毒素進入臨床試驗。然而，這些重組毒素應用于臨床的一個 主要限制是毒素分子具有的高度免疫原性會引起人體免疫應答，而細菌或植物毒素無法用標準 化技術將其人源化。另一個限制則是此類毒素都表現出一定程度的非特異性毒性，在濃度較高 時會損傷不表達特異性靶抗原的正常細胞，從而限制給藥劑量或持續給藥。

因此，本領域迫切需要開發新的具有低免疫原性(或無免疫原性)和高特異性的細胞毒素。

發明內容

本發明的一個目的就是提供一種新的細胞毒素，所述的細胞毒素具有低免疫原性(或無免 疫原性)和高特異性，具體地，所述的細胞毒素是IL-24和Bax的融合蛋白。

本發明的另一目的是提供編碼所述融合蛋白的DNA、含該DNA序列的載體，含該載體 的宿主細胞。

本發明的另一目的是提供一種所述IL24-Bax融合蛋白的制備方法和用途。

在本發明的第一方面，提供了一種融合蛋白，它包括：

(a)白介素-24元件；

(b)Bax蛋白元件；以及

(c)任選的位于白介素-24元件和Bax蛋白元件之間的連接肽序列。

在另一優選例中，所述融合蛋白的的結構如式I所示：

Xa—L—Xb??????(式I)

式中，

Xa和Xb分別獨立地選自(a)白介素-24元件，該元件具有人白介素-24或其活性片段的氨 基酸序列，或(b)Bax蛋白元件，該元件具有人Bax蛋白或其活性片段的氨基酸序列；并且Xa 和Xb不同時為Bax蛋白元件，也不同時為白介素-24元件；

L為無，或長度為1-50個(較佳地1-20個)氨基酸的連接肽序列。

在另一優選例中，所述的連接肽是長度為1-20個氨基酸的連接肽序列。

在另一優選例中，所述的白介素-24元件位于N端而Bax元件位于C端。

在另一優選例中，所述的白介素-24元件位于C端而Bax元件位于N端。

在另一優選例中，所述的Bax蛋白元件具有SEQ?ID?NO:2中第2-192位的氨基酸序列；

所述的白介素-24元件具有SEQ?ID?NO:4中第1-207位、50-207位的氨基酸序列；

而且，所述的接頭肽序列含4-10個氨基酸。

在另一優選例中，所述的融合蛋白包括SEQ?ID?NO:6中第1-411位，第1-405位，第50-405 位，或第50-411位所示的氨基酸序列。

在本發明的第二方面，提供了分離的DNA分子，它編碼本發明上述的融合蛋白。較佳地， 所述的DNA分子編碼包括SEQ?ID?NO:6中所示的氨基酸序列的融合蛋白。更佳地，它包括SEQ ID?NO:5所示的核苷酸序列，尤其是對應于SEQ?ID?NO:6中第1-411位、第1-405位、第50-405 位、或第50-411位的核苷酸序列。

在本發明的第三方面，提供了含有上述DNA分子的載體和含有上述載體的宿主細胞。

在另一優選例中，所述的載體是腺病毒載體。