[發明專利]一種真菌制備草酸脫羧酶的方法

無效

• 申請號: 200710040314.4
• 申請日: 2007-04-29
• 公開（公告）號: CN101063119A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: 洪楓;朱翠俠
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所
• 代理人: 黃志達;謝文凱

1.一種真菌制備草酸脫羧酶的方法，包括下列步驟：

(1)配制酸溶液

濃度1mol/L～5mol/L的有機酸或無機酸溶液經過120～121℃高溫濕熱滅菌10～30min，或過濾除菌；

(2)制備草酸脫羧酶

彩絨革蓋菌或黑曲霉液體培養基初始pH值為4.5～5.5，反應溫度20～28℃，通空氣量為20～30L/L·h，在菌體生長的第三或第四天，快要進入對數生長期時開始添加上述的酸溶液作為誘導劑，使彩絨革蓋菌培養基pH值0～3或黑曲霉液體培養基pH值0～2，在培養過程中定期取樣測酶活，至酶活最大時終止反應；

用離心機于轉速9000～12000rpm條件下離心20～30min收集菌體細胞，或通過過濾得到新鮮的菌體細胞，用0.05～0.2mol/L，pH值為3～3.7的醋酸緩沖溶液淋洗后再次收集，將得到的新鮮菌絲體用液氮迅速冷凍，研磨菌絲體成粉末狀，加入0.05～0.2mol/L?pH值為3～3.7的醋酸-醋酸鈉緩沖液，繼續研磨成糊狀，離心機在12000rpm，離心20～30min，得到草酸脫羧酶液；

其中，所述的真菌為彩絨革蓋菌或黑曲霉。

2.根據權利要求1所述的一種真菌制備草酸脫羧酶的方法，其特征在于：步驟1中所述的誘導劑為鹽酸、硫酸、磷酸、草酸、乙酸、丙二酸、丁二酸、酒石酸、檸檬酸或反丁烯二酸。

3.根據權利要求1所述的一種真菌制備草酸脫羧酶的方法，其特征在于：步驟1中所述的有機酸溶液為草酸溶液時，配制離子濃度為0.5mol/L。

4.根據權利要求1所述的一種真菌制備草酸脫羧酶的方法，其特征在于：步驟2中所述的酸溶液為草酸時，添加量使彩絨革蓋菌培養基中草酸根離子濃度為3～40mmol/L或使黑曲霉液體培養基中草酸根離子濃度為5～40mmol/L。