[發明專利]冠心病檢測方法和試劑盒

無效

• 申請號: 200710040117.2
• 申請日: 2007-04-27
• 公開（公告）號: CN101294212A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: 黃薇;王穎;王海豐;王一;金力
• 申請（專利權）人: 上海人類基因組研究中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 徐迅

技術領域

本發明涉及分子生物學和醫學領域。更具體地涉及對氧磷酶3(Paraoxonase3，PON3)的單核苷酸多態性(single?nucleotide?polymorphism，SNP)及其與動脈粥樣硬化和/或冠心病的相關性。本發明還涉及檢測這些SNP的方法和試劑盒。

背景技術

動脈粥樣硬化是一種常見的進行性動脈疾病，病變主要累及中等大小的肌層動脈，動脈內膜脂質沉積，平滑肌細胞增生，形成局限性斑塊，可使動脈壁變硬，嚴重時斑塊破裂導致血栓、栓塞、出血，受累管腔部分或完全閉塞，臨床表現為動脈粥樣硬化血管并發癥的發生，老年患者中最常見和最嚴重的血管并發癥是動脈粥樣硬化和/或冠心病(不穩定性心絞痛和心肌梗塞)和腦卒中。

動脈粥樣硬化病變的發生和發展主要經歷了四個循序漸進的病理過程：

1.脂質浸潤前期內膜改變：內皮損傷

2.脂質條紋：泡沫細胞、T淋巴細胞聚集，平滑肌細胞增生。

3.纖維斑塊：平滑肌纖維化，形成纖維帽。

4.復合病變：斑塊鈣化、破裂、潰瘍，中膜病變。

動脈粥樣硬化的病因及發病機制十分復雜，是動脈壁的細胞、細胞外基質、血液成分(特別是單核細胞、血小板和LDL)、局部血流動力學、環境及遺傳因素之間一系列復雜作用的結果，因而病因并非是單一因素的。

動脈粥樣硬化作為多基因疾病，發病原因不僅涉及到多個作用不同的基因，而且還涉及到基因-基因、基因-環境的相互作用。現在關于動脈粥樣硬化發病機理的學說有很多，如滲入脂質學說、血管內膜損傷學說、炎癥反應學說、氧化-抗氧化學說及血栓形成學說。所有這些學說都涉及到不同的生物通路，但是現在還沒有一種學說能夠在遺傳學和分子生物學上得到完整的解釋。

多年來，基于對動脈粥樣硬化致病危險因素的長期研究，科學家們針對這些危險因素開展了大量的工作。目前為止，已經發現了血管緊張素I轉化酶(ACE)和MTHFR的某些插入、缺失和突變可能使動脈粥樣硬化和/或冠心病致病的潛在危險因素。前者使血壓調節中發揮重要功能的酶類之一，后者是一種與半胱氨酸代謝有關的酶。

另外，德國科學家最近證實，AT1受體的表達水平與血管受損過程緊密聯系：ACE抑制劑會減少AT1受體的激活，從而改善血管功能不良、有效的抑制動脈粥樣硬化的發生和發展。

但長期以來，國內外研究較多地集中于脂質代謝通路中相關基因的突變及表達，如：副氧酶、脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶等。在對內源性一氧化氮合成酶(eNOS)的研究中，現在已有一些研究工作表明eNOS與動脈粥樣硬化的緊密關聯。另有美國科學家提出了炎癥機制在動脈粥樣硬化的形成中的作用，并在小鼠試驗中得到了一定的證實。

近年來，單核苷酸多態性(SNP)和單倍型(haplotype)概念在多基因疾病研究中的廣泛運用，為在分子水平上研究動脈粥樣硬化的發生和發展的機制開辟了全新的思路。同時，高通量、低成本的SNP檢測手段的不斷出現也為SNP大規模快速分型提供了可能。

日本科學家利用大規模的病例-對照研究對9萬多個相關基因SNPs進行了關聯分析，發現了一個50KB的單倍型區域與心肌梗死密切相關，其中包括LTA(lymphotoxin-α)，NFKBIL1和BAT1等的多個SNP位點。

在另一研究中，雖然P-選擇素(P-selectin)中S290N和N562D各自與心肌梗塞都沒有獨立相關性，但它們構成的單倍型卻與心肌梗塞顯著相關。

此外，SNP的存在與否以及等位基因頻率存在人種及地域的差異，這就提示多基因疾病遺傳異質性的存在，即同一疾病或性狀在不同的人群中可能是不同的遺傳因素造成的。在對凝血因子V基因的研究中，中國人群中未能發現國外報道的與白人女性心肌梗塞發病具有相關性的VLeiden突變，卻發現了一個新的SNP-G/A1628(Arg485Lys)突變與APCR及動脈粥樣硬化和/或冠心病相關，凝血因子V基因可能是中國人群動脈粥樣硬化的一個易感基因。

另外，不同人群中SNP及其單倍型的類型和頻率存在的這種差異可能與不同人群對藥物及環境因素的反應性不同密切相關。

在過去的50多年來，大規模的流行病學調查和遺傳研究已經對冠狀動脈粥樣硬化這一復雜疾病做了一系列的研究，發現了一些易感基因與動脈粥樣硬化相關，例如ABCA1、CYBA、ApoE、LDLR等。更多的與動脈粥樣硬化相關繼續在發現和驗證中。