[發(fā)明專利]冠心病檢測方法和試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710040113.4
• 申請日: 2007-04-27
• 公開（公告）號: CN101294209A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃薇;王穎;王海豐;王一;金力
• 申請（專利權(quán)）人: 上海人類基因組研究中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 徐迅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。更具體地涉及整聯(lián)蛋白α2(Integrinalpha?2，ITGA2)的單核苷酸多態(tài)性(single?nucleotide?polymorphism，SNP)及其與動脈粥樣硬化和/或冠心病的相關(guān)性。本發(fā)明還涉及檢測這些SNP的方法和試劑盒。

背景技術(shù)

動脈粥樣硬化是一種常見的進(jìn)行性動脈疾病，病變主要累及中等大小的肌層動脈，動脈內(nèi)膜脂質(zhì)沉積，平滑肌細(xì)胞增生，形成局限性斑塊，可使動脈壁變硬，嚴(yán)重時斑塊破裂導(dǎo)致血栓、栓塞、出血，受累管腔部分或完全閉塞，臨床表現(xiàn)為動脈粥樣硬化血管并發(fā)癥的發(fā)生，老年患者中最常見和最嚴(yán)重的血管并發(fā)癥是動脈粥樣硬化和/或冠心病(不穩(wěn)定性心絞痛和心肌梗塞)和腦卒中。

動脈粥樣硬化病變的發(fā)生和發(fā)展主要經(jīng)歷了四個循序漸進(jìn)的病理過程：

1.脂質(zhì)浸潤前期內(nèi)膜改變：內(nèi)皮損傷

2.脂質(zhì)條紋：泡沫細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞聚集，平滑肌細(xì)胞增生。

3.纖維斑塊：平滑肌纖維化，形成纖維帽。

4.復(fù)合病變：斑塊鈣化、破裂、潰瘍，中膜病變。

動脈粥樣硬化的病因及發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，是動脈壁的細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、血液成分(特別是單核細(xì)胞、血小板和LDL)、局部血流動力學(xué)、環(huán)境及遺傳因素之間一系列復(fù)雜作用的結(jié)果，因而病因并非是單一因素的。

動脈粥樣硬化作為多基因疾病，發(fā)病原因不僅涉及到多個作用不同的基因，而且還涉及到基因-基因、基因-環(huán)境的相互作用。現(xiàn)在關(guān)于動脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)理的學(xué)說有很多，如滲入脂質(zhì)學(xué)說、血管內(nèi)膜損傷學(xué)說、炎癥反應(yīng)學(xué)說、氧化-抗氧化學(xué)說及血栓形成學(xué)說。所有這些學(xué)說都涉及到不同的生物通路，但是現(xiàn)在還沒有一種學(xué)說能夠在遺傳學(xué)和分子生物學(xué)上得到完整的解釋。

多年來，基于對動脈粥樣硬化致病危險(xiǎn)因素的長期研究，科學(xué)家們針對這些危險(xiǎn)因素開展了大量的工作。目前為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶(ACE)和MTHFR的某些插入、缺失和突變可能使動脈粥樣硬化和/或冠心病致病的潛在危險(xiǎn)因素。前者使血壓調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要功能的酶類之一，后者是一種與半胱氨酸代謝有關(guān)的酶。

另外，德國科學(xué)家最近證實(shí)，AT1受體的表達(dá)水平與血管受損過程緊密聯(lián)系：ACE抑制劑會減少AT1受體的激活，從而改善血管功能不良、有效的抑制動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。

但長期以來，國內(nèi)外研究較多地集中于脂質(zhì)代謝通路中相關(guān)基因的突變及表達(dá)，如：副氧酶、脂蛋白脂肪酶、肝脂肪酶等。在對內(nèi)源性一氧化氮合成酶(eNOS)的研究中，現(xiàn)在已有一些研究工作表明eNOS與動脈粥樣硬化的緊密關(guān)聯(lián)。另有美國科學(xué)家提出了炎癥機(jī)制在動脈粥樣硬化的形成中的作用，并在小鼠試驗(yàn)中得到了一定的證實(shí)。

近年來，單核苷酸多態(tài)性(SNP)和單倍型(haplotype)概念在多基因疾病研究中的廣泛運(yùn)用，為在分子水平上研究動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制開辟了全新的思路。同時，高通量、低成本的SNP檢測手段的不斷出現(xiàn)也為SNP大規(guī)模快速分型提供了可能。

日本科學(xué)家利用大規(guī)模的病例-對照研究對9萬多個相關(guān)基因SNPs進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)了一個50KB的單倍型區(qū)域與心肌梗死密切相關(guān)，其中包括LTA(lymphotoxin-α)，NFKBIL1和BAT1等的多個SNP位點(diǎn)。

在另一研究中，雖然P-選擇素(P-selectin)中S290N和N562D各自與心肌梗塞都沒有獨(dú)立相關(guān)性，但它們構(gòu)成的單倍型卻與心肌梗塞顯著相關(guān)。

此外，SNP的存在與否以及等位基因頻率存在人種及地域的差異，這就提示多基因疾病遺傳異質(zhì)性的存在，即同一疾病或性狀在不同的人群中可能是不同的遺傳因素造成的。在對凝血因子V基因的研究中，中國人群中未能發(fā)現(xiàn)國外報(bào)道的與白人女性心肌梗塞發(fā)病具有相關(guān)性的VLeiden突變，卻發(fā)現(xiàn)了一個新的SNP-G/A1628(Arg485Lys)突變與APCR及動脈粥樣硬化和/或冠心病相關(guān)，凝血因子V基因可能是中國人群動脈粥樣硬化的一個易感基因。

另外，不同人群中SNP及其單倍型的類型和頻率存在的這種差異可能與不同人群對藥物及環(huán)境因素的反應(yīng)性不同密切相關(guān)。

在過去的50多年來，大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查和遺傳研究已經(jīng)對冠狀動脈粥樣硬化這一復(fù)雜疾病做了一系列的研究，發(fā)現(xiàn)了一些易感基因與動脈粥樣硬化相關(guān)，例如ABCA1、CYBA、ApoE、LDLR等。更多的與動脈粥樣硬化相關(guān)繼續(xù)在發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證中。