[發(fā)明專利]一種用于診斷肝癌的ELISA試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710039562.7
• 申請日: 2007-04-17
• 公開（公告）號: CN101290318A
• 公開（公告）日: 2008-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 屠紅;周偉;趙新泰
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;G01N33/53
• 代理公司: 上海專利商標事務(wù)所有限公司
• 代理人: 徐迅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)和免疫學領(lǐng)域，具體涉及檢測肝癌標記物硫酸肝素蛋 白多糖3(GPC3)的抗體、試劑盒以及它們的用途。

背景技術(shù)

原發(fā)性肝癌是全球第6位、中國第3位最常見的癌癥。據(jù)國際癌癥研究中 心(IARC)估計，2000年全球肝癌發(fā)病數(shù)為56.4萬人，其中約55％發(fā)生在中國， 即中國肝癌發(fā)病30.6萬人，肝癌死亡30.0萬，占我國居民腫瘤死亡的第二位。 肝癌出現(xiàn)癥狀時多屬中晚期，切除后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率高。因此，肝癌的早期診斷 對延長患者的生存時間和降低肝癌死亡率具有重要意義。

目前，影像學診斷、細胞與組織學診斷及化學診斷是腫瘤診斷的三大主要 方法。影像學診斷在肝癌診斷中起重要的作用，但是在診斷小肝癌及區(qū)分良惡 性結(jié)節(jié)中均具有一定的局限。超聲檢查或CT陽性結(jié)果，結(jié)合血清甲胎蛋白 (α-fetoprotein，AFP)水平高于400ng/ml的檢測結(jié)果，可對肝癌做出確診。 但是，通常當這些條件都符合時，已經(jīng)錯過了治療的最佳時機。無論是超聲波 檢查、CT掃描還是核磁共振，對小病灶的鑒定都有一定的局限性，尤其是肝硬 化結(jié)節(jié)在影象學上與小肝癌結(jié)節(jié)有許多的相似之處。因此，雖然影像學技術(shù)在 今年來取得了巨大的進步，但臨床上仍需結(jié)合肝癌的分子標志物，在較為復(fù)雜 的病例中將良惡性肝病進行區(qū)分。此外，腫瘤的臨床分期及腫瘤大小是肝癌治 療效果的決定因素，因此，腫瘤標志物還可用于肝癌危險人群(如HBV慢性攜 帶者和肝硬化患者)的普查。

目前肝癌診斷最常用的標志物是甲胎蛋白(AFP)，在癥狀和影像學改變發(fā) 生前數(shù)月即可出現(xiàn)異常。正常人血清中AFP含量一般小于10ng/ml。當AFP的 診斷值定為20ng/ml時，其敏感性為50～60％，但在腫瘤較小的病例中，敏感 性顯著降低，有報道僅為40％。單獨使用AFP作為肝癌診斷標志物的另一個問 題是缺乏特異性，在相當多的慢性肝炎患者尤其是肝硬化患者中，AFP含量也 達20-200ng/ml。目前認為可與AFP互補診斷的標志物有AFP異質(zhì)體、γ-谷氨 酰轉(zhuǎn)移酶同工酶II和異常凝血酶原等，但由于它們在敏感性和特異性上的不 足，以及檢測方法的繁瑣復(fù)雜，使其始終停留在實驗室研究水平，未能轉(zhuǎn)化成 臨床常規(guī)檢查項目。因此，探索新的腫瘤分子標志物，以及建立相應(yīng)的易于推 廣的檢測方法，仍是當今肝癌研究領(lǐng)域的重要課題之一。

硫酸肝素蛋白多糖3(Glypican-3，GPC3)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種與肝癌相關(guān) 的分子。應(yīng)用差異顯示技術(shù)，Hsu等首次發(fā)現(xiàn)了cDNA100％同源于GPC3的MXR7 基因在肝癌組織中有異常表達。在191例肝細胞癌(HCC)組織中，143例(74.8％) 能檢測到了MXR7的mRNA，而在156例癌旁“非瘤”肝組織中僅有5例(3.2％) 為陽性，該5例均為有門脈或遠處轉(zhuǎn)移的病例。隨后，多家實驗室相繼證實了 這一結(jié)果。在HCC組織中，GPC3mRNA和蛋白陽性檢出率均在73％以上，mRNA 平均水平可較正常肝組織中高出21.7倍，而在正常肝臟、肝臟良性腫瘤、慢 性肝炎和肝硬化等中則均呈陰性，表明該蛋白表達具有較高的腫瘤細胞特異 性，是一種新型的肝癌標志物。

然而，由于正常人外周血中GPC3含量微弱，腫瘤患者血清中GPC3含量盡 管明顯增加但仍然處于較低水平，建立靈敏度高的檢測系統(tǒng)非常不易，導致這 樣腫瘤標志物迄今未能進入臨床使用。

因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)可靈敏檢測GPC3水平的檢測系統(tǒng)以及檢測方 法，為臨床腫瘤的診斷提供良好的途徑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供可靈敏、準確地檢測樣品中硫酸肝素蛋白多糖3含 量的檢測試劑。

本發(fā)明的目的還在于提供檢測樣品中硫酸肝素蛋白多糖3含量的檢測試劑 盒。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種用于檢測硫酸肝素蛋白多糖3的測試片， 所述的測試片包括：

固相載體；和

包被于所述固相載體的抗硫酸肝素蛋白多糖3的多克隆抗體，所述的多克 隆抗體特異性結(jié)合于硫酸肝素蛋白多糖3第379-393位中的表位，而不結(jié)合于 硫酸肝素蛋白多糖3的1-378位或394-580位中的表位。

在另一優(yōu)選例中，所述固相載體是酶標反應(yīng)板。

在本發(fā)明的第二方面，提供一種檢測試劑盒，所述的試劑盒含有所述的測試 片，或者

所述的試劑盒含有：(a)固相載體；