[發(fā)明專利]水稻OsCS編碼序列及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710039409.4
• 申請(qǐng)日: 2007-04-12
• 公開（公告）號(hào): CN101058816A
• 公開（公告）日: 2007-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 明鳳;張珊珊;沈大棱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/52
• 分類號(hào): C12N15/52;C12N9/00;C12N15/82;C12Q1/68
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛;盛志范

1.一種分離出的DNA分子，其特征在于，它包括：編碼具有水稻檸檬酸合酶活性的開放讀框，其核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1。

2.如權(quán)利要求1所述的DNA分子，其特征在于，該序列編碼具有SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列的多肽。

3.一種將如權(quán)利要求1所述的編碼具有水稻檸檬酸合酶的核苷酸序列轉(zhuǎn)入煙草以提高檸檬酸分泌量的方法，其特征在于具體步驟如下：

(1)將編碼具有水稻檸檬酸合酶的核苷酸序列可操作的連接于植物表達(dá)載體，形成含有SEQ?ID?NO.1的載體；

(2)將步驟(1)中的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，將含表達(dá)載體的農(nóng)桿菌同煙草葉片共培養(yǎng)，在25±2℃條件下，暗培養(yǎng)2天；

(3)通過(guò)抗生素篩選，PCR鑒定，獲得轉(zhuǎn)化細(xì)胞并最終再生轉(zhuǎn)基因植株，轉(zhuǎn)基因植物的檸檬酸分泌量增加。

4.一種用于檢測(cè)樣品中水稻檸檬酸合酶拷貝數(shù)的方法，其特征在于它包括用權(quán)利要求1中所述序列與樣品雜交，然后檢測(cè)探針是否發(fā)生了結(jié)合；該樣品是水稻和轉(zhuǎn)基因煙草基因組DNA，經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切后的核苷酸序列。

5.用于鑒定轉(zhuǎn)基因煙草的核酸分子，其特征在于，它包含SEQ?ID?NO.1所示的DNA分子中893-910個(gè)連續(xù)的核苷酸和1405-1425個(gè)連續(xù)核苷酸的反向互補(bǔ)序列。

6.一種用于檢測(cè)樣品中是否存在水稻檸檬酸合酶核苷酸序列的方法，其特征在于它包括用權(quán)利要求5所述核苷酸序列與樣品進(jìn)行PCR反應(yīng)，然后檢測(cè)是否擴(kuò)增出目的片段；樣品為轉(zhuǎn)基因煙草組DNA。