[發明專利]一種乳糖誘導型表達載體及其轉化的粘質沙雷氏菌

無效

• 申請號: 200710036987.2
• 申請日: 2007-01-30
• 公開（公告）號: CN101235383A
• 公開（公告）日: 2008-08-06
• 發明（設計）人: 魏東芝;沈亞領;朱虎;周文瑜;曹學
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N1/21;C12N15/53;C12P7/18;C12R1/43
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 薛琦

1.?一種乳糖誘導表達載體，其特征在于，該載體以含有lac啟動子和操縱子的克隆質粒為出發載體，可操作的插入含有乳糖操縱子阻遏蛋白編碼基因的表達盒。

2.?根據權利要求1所述的誘導型表達載體，其特征在于，出發載體為pUC18/19，含有乳糖操縱子阻遏蛋白編碼基因的表達盒可操作的插入pUC18/19質粒的Ssp?I位點。

3.?根據權利要求1所述的誘導型表達載體，其特征在于，其中所述的含有乳糖操縱子阻遏蛋白編碼基因的表達盒為：

以pET28a⁽⁺⁾質粒為模板

上游引物：5’-ACACCATCGAATGGCGCAA-3’

下游引物：5’-TCACTGCCCGCTTTCCAGT-3’

經PCR擴增所獲得的片段。

4.?根據權利要求1~3中的任一項所述的誘導型表達載體，其特征在于，該載體稱為pLHZH，含有lac啟動子和操縱子、編碼lacI阻遏蛋白的lacI^q基因以及oriCOE1復制起點。

5.?一種基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌，其特征在于，用內消旋-2，3-丁二醇脫氫酶(meso-2，3-BDH)基因轉化粘質沙雷氏菌。

6.?根據權利要求5所述的改造的粘質沙雷氏菌，其特征在于，內消旋-2，3-丁二醇脫氫酶(meso-2，3-BDH)基因可操作的插入誘導表達載體pLHZH，得到重組表達載體pLHZH-BDH，再用重組表達載體pLHZH-BDH轉化野生型粘質沙雷氏菌得到的轉化菌。

7.?根據權利要求6所述的基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌，其特征在于，所述的meso-2，3-BDH基因來自克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)。

8.?根據權利要求6所述的基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌，其特征在于，所述的野生型粘質沙雷氏菌為Serratia?marcescens?B17。

9.?一種生產內消旋-2，3-丁二醇的方法，其特征在于，用權利要求6~8中的任一項所述的基因重組技術改造的粘質沙雷氏菌發酵生產內消旋-2，3-丁二醇。

10.?根據權利要求10所述的方法，其特征在于，可用乳糖作為誘導劑發酵生產內消旋-2，3-丁二醇。