[發明專利]鐵皮石斛試管苗的特征DNA序列及其應用

有效

• 申請號: 200710036926.6
• 申請日: 2007-01-29
• 公開（公告）號: CN101235377A
• 公開（公告）日: 2008-08-06
• 發明（設計）人: 顧慧芬;梅其春;莊意麗
• 申請（專利權）人: 上海雷允上科技發展有限公司;上海市中藥研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12Q1/68
• 代理公司: 上海光華專利事務所
• 代理人: 許亦琳;余明偉

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，進一步的本發明涉及鐵皮石斛試管苗的特征DNA序列及其應用。

背景技術

鐵皮石斛(Dendrobium?officinale?Kimura?et?Migo)，隸屬于蘭科(Orchidaceae)石斛屬(Dendrobium?Sw.)，為多年生附生草本，是我國傳統名貴中藥之一，列為上品，具有潤喉消毒、生津益胃、清熱養陰等功效。現代藥理研究表明，鐵皮石斛具有抗腫瘤、抗衰老、增強機體免疫力，擴張血管及抗血小板凝集等作用。

鐵皮石斛生長環境特殊，加之長期的采挖，已成為稀有、瀕危的藥用植物。為拯救這一珍貴藥源，近年來通過無性繁殖試管苗以及試管苗栽培的成功，實現了鐵皮石斛資源的可持續開發和利用。

石斛屬(Dendrobium?Sw.)全世界約有1000種，我國有74種2變種，其中可做藥用的種類繁多，中國藥典(2000年以前版本)收載石斛為蘭科(Orchidaceae)石斛屬(DendrobiumSw.)鐵皮石斛Dendrobium?offcinale、金釵石斛D.nobile、黃草石斛D.chrysanthum、環草石斛D.loddigesii、馬鞭石斛D.fimbriatum的新鮮或干燥莖。因鐵皮石斛的珍貴、稀有、來源有限等，其混淆品也就屢見不鮮；另外，通過無性繁殖培植的試管苗，因植株較小，在外形上無法判斷其來源的種類；還有，試管苗在繁殖和栽培的過程中，由于生態環境的改變和人們生產活動的影響，是否會發生變異等，這些現象如果依靠傳統的方法進行鑒定非常困難。

隨著分子生物技術的迅速發展，DNA分子標記技術在中藥鑒定方面的應用已取得了許多進展(曹暉等，DNA分子指紋圖譜與測序技術在中藥品質研究中的現狀與展望，中國中藥雜志，1998，23(11)；姜玉新，石思信，張志娥等.人參、西洋參的基因組DNA的RAPD分析.特產研究，1998，(1)：5；Kitanaka?S，Kunishi?M，Taira?T，et?al.Ginsenosideproduction，tissue?culture?and?induction?of?regeneration?of?interspecific?hybridginseng(Panax?ginseng×P.quinquefolium).Natural?Med，1997，51：1；Ngan?FN，Wang?J，But?PPH，et?al.Application?of?arbitrarily?primed?polymerase?chainreaction(AP-PCR)in?commercial?ginseng?products.5?th?International?Congress?ofPlant?Molecular?Biology，Singapore，1997)。本實驗通過隨機擴增多態性DNA(randomamplified?polymorphic?DNA，RAPD)方法，對鐵皮石斛試管苗及石斛屬中其它一些種類進行了研究，獲得了RAPD圖譜，從中篩選出鐵皮石斛試管苗特異性條帶，通過克隆、測序等，設計了特異性探針，應用于組培鐵皮石斛及野生鐵皮石斛鑒定，得到了滿意的結果，為鐵皮石斛的鑒定和可持續開發及利用等提供了分子生物學方面的依據。

發明內容

本發明的目的是公開鐵皮石斛試管苗的特征DNA序列及其應用。

本發明一方面公開了一種鐵皮石斛試管苗的特征DNA序列，它是SEQ?ID?NO：1的DNA序列或其互補序列。

本發明另一方面公開了上述鐵皮石斛試管苗的特征DNA序列在鐵皮石斛試管苗鑒定中的應用。

較佳的，利用針對上述鐵皮石斛試管苗特征DNA序列的特異性探針鑒定鐵皮石斛試管苗或鐵皮石斛。

本發明第三方面公開了一種檢測樣品中是否含有鐵皮石斛試管苗特征DNA序列的方法，包括下列步驟：

(1)使用針對鐵皮石斛試管苗特征DNA序列的特異性探針對樣品的基因進行擴增；

(2)檢測是否獲得相應的擴增產物。

較優的，上述鐵皮石斛試管苗的特異性探針序列選自下組中的一組或多組：

(1)5′AGGAAGATGAACTTGCCGATAC?3′(SEQ?ID?NO：8)

和5′TCGGTCGTCCCGTCGTAT?3′(SEQ?ID?NO：9)；

(2)5′AAGTGCCAAATGTTGAGTC?3′(SEQ?ID?NO：10)

和5′CCTGGAATCTGTCGTGCT?3′(SEQ?ID?NO：11)