[發(fā)明專利]有抗肝癌細胞生長作用的土貝母粗提組分及其CDK1激酶抑制活性

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710036683.6
• 申請日: 2007-01-22
• 公開（公告）號: CN101229215A
• 公開（公告）日: 2008-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 岳利多;覃文新;姚根富;顧健人;楊勝利
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號: A61K36/42
• 分類號: A61K36/42;A61P35/00;A61K125/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 徐迅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物篩選和中草藥藥效學評價領(lǐng)域。本發(fā)明更具體地涉及中草藥土貝母(Bolbostemma?Paniculatum(Maxin.)Franquet)提取物的有效成分及其用途。

背景技術(shù)

惡性腫瘤(通稱癌癥)，是當前威脅人類健康的主要疾病之一。據(jù)WTO統(tǒng)計，2002年全世界因惡性腫瘤死亡人數(shù)達710.6萬。我國2000年癌癥發(fā)病人數(shù)180-200萬，死亡人數(shù)140-150萬。外科療法與放射療法在惡性腫瘤治療中具有重要作用，但由于腫瘤往往出現(xiàn)擴散與轉(zhuǎn)移，對于惡性腫瘤迫切需要全身性的有效治療方法。

細胞周期激酶家族(CDK)在細胞周期調(diào)控中具有極其重要的作用，多數(shù)惡性增生性疾病的發(fā)生、發(fā)展均與細胞周期調(diào)控功能紊亂有關(guān)。不受控制的細胞增殖是惡性腫瘤的最重要特征。所以，對CDK的激酶功能進行抑制是治療增生性(即細胞過度增殖性的)疾病的新策略。

CDK1(又稱cdc2)是CDK家族的主要成員，其功能有：(1)負責有絲分裂期的調(diào)控；(2)促進細胞跨越有絲分裂的檢查點，完成有絲分裂等。因此，設(shè)計開發(fā)對CDK1具有高選擇性的天然化合物將成為抗腫瘤藥物的開發(fā)亮點。可參見例如，Charles?Kung等，“利用差別途徑敏感性的選擇性激酶抑制”，SelectiveKinase?Inhibition?by?Exploiting?Differential?Pathway?Sensitivity，Chemistry?&Biology?13，399-407，2006年4月；Yun?Dai等，“細胞周期蛋白激酶抑制劑”，Cyclin-dependent?kinase?inhibitors，Current?Opinion?in?Pharmacology，3：362-370，2003。

我國利用中草藥抗腫瘤已有悠久的歷史。中草藥抗腫瘤與傳統(tǒng)化療藥相比，具有毒副作用小等優(yōu)點。從中草藥活性成分中篩選針對CDK的抗腫瘤化合物將具有重要意義。

土貝母(Bolbostemma?Paniculatum(Maxin.)Franquet)，屬葫蘆科植物，其性味苦，微寒。功能為散結(jié)、消腫、解毒。中醫(yī)上用于治療乳腺炎、頸腋淋巴結(jié)結(jié)核、慢性淋巴結(jié)炎、肥厚性鼻炎等。從土貝母中已經(jīng)分離出的土貝母皂苷分別在中國專利CN94104124.7、CN95113751.4、CN99106201.9和CN200410021843.6中被證明具有廣譜的抗癌效果。

具有抗腫瘤作用的土貝母活性組分是否同時具有CDK1的抑制活性，這將為從中草藥中尋找新型抗腫瘤藥物CDK1抑制劑提供有用線索。本領(lǐng)域迫切需要研究并分離出同時兼具抑制腫瘤細胞增殖和抑制CDK1激酶活性的天然藥物活性成分，以更低毒、高效地治療癌癥。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的正是提供一種同時兼具抑制腫瘤細胞增殖和抑制CDK1激酶活性的天然藥物活性成分。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種分離自土貝母提取物的土貝母有效成分，該有效成分具有以下特性：

(a)在如下的反相高壓液相色譜層析條件下，所述土貝母有效成分在第30±5分鐘時流出：

層析柱：C18預裝的制備型層析柱，

流動相：75％甲醇水溶液，

流速：4ml/分鐘

檢測波長：280nm；

(b)所述的有效成分對肝癌細胞7721的生長有抑制作用；和

(c)所述的有效成分對CDK1激酶活性有抑制作用。

在本發(fā)明的一個實施方式中，所述土貝母提取物是土貝母的水溶性提取物。

在另一優(yōu)選例中，所述的提取物是用選自甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃、或N，N-二甲基甲酰胺有機溶劑或所述有機溶劑與水的混合溶劑進行提取所獲得的提取物。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，所述土貝母提取物是土貝母甲醇提取物。

在本發(fā)明的一個實施方式中，所述有效成分對肝癌細胞7721的生長抑制率≥70％，和/或?qū)DK1激酶活性的抑制率≥70％。

在另一優(yōu)選例中，該抑制率用以下公式計算：

在本發(fā)明的一個實施方式中，所述有效成分對肝癌細胞7721的生長抑制率≥80％，和/或?qū)DK1激酶活性的抑制率≥80％。

在本發(fā)明的一個實施方式中，所述有效成分對肝癌細胞7721的生長抑制達到81.5％以上，且對CDK1激酶活性的抑制達88％以上。

在本發(fā)明的一個實施方式中，所述有效成分在第28±2分鐘、或在32±2分鐘流出。

在另一優(yōu)選例中，所述有效成分在第28±1分鐘、或在32±1分鐘流出。