[發明專利]一種從食用螺肺中檢測廣州管圓線蟲幼蟲的方法

無效

• 申請號: 200710036298.1
• 申請日: 2007-01-09
• 公開（公告）號: CN101221132A
• 公開（公告）日: 2008-07-16
• 發明（設計）人: 劉和香;張儀;呂山;周曉農;胡鈴
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所
• 主分類號: G01N21/84
• 分類號: G01N21/84;G01N33/48;G01N1/28
• 代理公司: 上海世貿專利代理有限責任公司
• 代理人: 李浩東

技術領域：

本發明涉及醫學寄生蟲方向的生物檢測技術領域，具體地說是一種從食用螺肺中檢測廣州管圓線蟲幼蟲的方法。

背景技術：

廣州管圓線蟲感染期幼蟲(III期幼蟲)必須在軟體動物體內發育完成，因此軟體動物在傳播廣州管圓線蟲中起到極其重要的作用。隨著福壽螺與褐云瑪瑙螺的入侵和不斷擴散，我國廣州管圓線蟲呈擴散趨勢。目前，本蟲的中間宿主多達70余種，在其眾多中間宿主中褐云瑪瑙螺與福壽螺是廣州管圓線蟲的重要中間宿主。因此，尋找快速檢測福壽螺體內廣州管圓線蟲的方法是預防廣州管圓線蟲病的重要手段。當前檢測螺體廣州管圓線蟲感染期幼蟲通常采用研磨勻漿與胃蛋白酶消化法(以下簡稱酶消化法)。研磨勻漿法：螺研磨或粉碎組織成糊液，置于錐型量筒加入脫氯水沉淀(靜置懸濁液)，傾倒上清液取沉淀濾液鏡檢。此法材料簡單，幼蟲活力保持較久，能直觀地顯示蟲態與活度，故適合幼蟲的分離、收集及動物接種。但檢測速度慢，沉淀物多而幼蟲容易漏檢。胃蛋白酶消化法：螺研碎后置于消化液中，然后傾入濾布中過濾，取濾布上的沉渣鏡檢。此法可靠、穩當，是檢測、分離收集幼蟲、計數和定量篩選比較理想的方法。但檢測速度較慢，且加酶后部分幼蟲易死亡。此外，其檢測需一定的材料與藥品如：胃蛋白酶、鹽酸、粉碎機、與恒溫箱等，因此，檢測耗時費力，故不太適合現場大規模螺的普測。此外關于分子生物檢測的技術雖然敏感可靠，能快速檢測螺體內早期幼蟲，但目前仍需亟待研究，還無法應用于現場進行大規模螺的普測。

發明內容：

本發明的目的是提供一種從食用螺肺中檢測廣州管圓線蟲幼蟲的方法，該方法適合現場進行檢測，并適合疫區大體螺類的定性篩查。

為了實現上述目的，本發明的技術方案是：一種從食用螺肺中檢測廣州管圓線蟲幼蟲的方法，其特征在于：a、將食用螺壓碎剔殼，b、沿外套膜的左側至后側的基部剪開，將外套膜向右翻開取外套膜的后半部分的橢圓形的囊狀結構的肺囊(圖1箭頭所示)，c、然后剪開肺囊囊袋呈雙層的兩邊沿，d、翻開肺囊囊袋呈單層后鋪平，e、直接光鏡觀測，使用的光鏡采用物鏡2.5-3.5倍，觀察其有無幼蟲結節，f、若囊袋層壁較厚，盡量拉平或用挑針撥動、玻片壓來觀察肺囊壁組織有無幼蟲結節。

一種從食用螺肺中檢測廣州管圓線蟲幼蟲的方法，其特征在于：a、將食用螺壓碎剔殼，b、沿外套膜(呈單層)的左側至后側剪開，將外套膜向右翻開并鋪平，c、然后直接光鏡觀測，使用的光鏡采用物鏡2.5-3.5倍，觀察其有無幼蟲結節。

本發明由于采用鏡檢肺幼蟲結節的方法(以下簡稱肺檢法)具有工序與材料簡單、方法簡便、經濟及檢測速度快的特點，且具有與現有技術的檢測方法相似的檢測效果。還可根據幼蟲結節的形狀及大小初步估計幼蟲處于的發育階段，適合疫區大體螺類的定性篩查。具體地說本發明與現有技術相比具有以下的有益效果：

(1)檢測速度快，實驗顯示：肺檢法速度明顯快于研磨勻漿及酶消化法統計分析差異有顯著性(χ²＝54.897，P＜0.01)可根據幼蟲結節的大小快速估出幼蟲處在的發育階段；

(2)敏感度高，螺肺鏡檢法、研磨勻漿及酶消化法檢測螺肺囊內幼蟲的敏感度分別為96.7％、93.4％與100％，統計分析差異無顯著性(χ²＝2.069，P＞0.05)顯示3種檢測方法具有相似的檢測效果；

(3)省時省力省材料，觀察表明，肺檢法快捷省力，只需簡單的解剖工具，打開肺囊袋直接鏡檢。一般情況下，當肺囊布滿幼蟲結節時，0.20-0.37分即可將螺定性。肺囊中幼蟲結節較少時，5-10分種可將螺定性，而此時若應用酶消化或勻漿法檢測，獲取幼蟲既費時又困難。

附圖說明：

圖1為福壽螺軟體及肺囊箭頭所示示意圖

圖2為具有瑪瑙螺肺幼蟲結節示意圖

圖3為具有福壽螺肺幼蟲結節示意圖

具體實施方式：

下面結合附圖和實施例對本發明進一步的描述。