[發明專利]一種具有高效降解吡啶能力的廣州蒼白桿菌

有效

• 申請號: 200710032874.5
• 申請日: 2007-12-26
• 公開（公告）號: CN101294140A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: 張國霞;孫國萍;曾國驅;許玫英
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F11/02;C12R1/01;C02F101/38
• 代理公司: 廣州科粵專利代理有限責任公司
• 代理人: 余炳和

技術領域

本發明涉及細菌領域，具體地說，涉及一種具有高效降解吡啶能力的廣州蒼白桿菌新菌種。

背景技術

作為一種典型的難降解有機污染物，雜環芳烴化合物造成的環境問題已經引起人們越來越多的重視。因其大多具有“三致作用”，危害著人類健康和生態平衡，目前雜環芳烴化合物在環境中的擴散已經造成了土壤、地下水等的嚴重污染。生物修復時解決此類問題的有效方法，利用從環境中篩選的降解微生物能夠有效去除污泥等環境中雜環和苯環類等污染物質。

吡啶作為最基本和典型的雜環芳烴物質而成為研究的焦點，特別是集中在純菌株對吡啶的生物降解特性。

蒼白桿菌屬是由Holmes等在1988年建立的新屬。細胞染色為革蘭氏陰性。專性好氧，最適生長溫度是20-30℃，接觸酶、氧化酶陽性。不水解明膠。能利用各種氨基酸、有機酸和碳水化合物為碳源。但至今尚未發現蒼白桿菌屬中有降解吡啶的菌株。

發明內容

本發明的目的是提出一種具有高效降解吡啶能力的廣州蒼白桿菌新菌種。

本發明通過對廣州某油漬氣廠的污泥進行分離、純化，得到蒼白桿菌屬的一個新種，經反復試驗，發現該菌種具有高效降解吡啶的能力，從而實現了本發明的目的。

本發明所提出的新菌種命名為：廣州蒼白桿菌(Ochrobactrum?guangzhouense)P₂。

本發明的廣州蒼白桿菌(Ochrobactrum?guangzhouense)P₂已于2007年12月5日保存在中國典型培養物保藏中心(地址：中國武漢市武漢大學)，其簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC?M?207191。

本發明的廣州蒼白桿菌P₂從廣州油漬氣廠的污泥進行分離、純化而得。其分離純化方法如下：

首先把污泥打散，取1g污泥放在以吡啶(1g/L)為唯一的液體基礎鹽培養基里培養(KH₂PO₄?2.93g，K₂HPO₄?5.87g，MgSO₄?0.3g，FeSO₄?0.01g，NaCl2g，(NH₄)₂SO₄?5g，微量鹽溶液2mL)。固體培養基中加入16g瓊脂。微量鹽溶液(mg/L)：MoO₃?4mg，ZnSO₄·5H₂O?28mg，CuSO₄·5H₂O?2mg，H₃BO₃4mg，MnSO₄·5H₂O?4mg，CoCl₂·6H₂O?4mg).培養一段時間后，轉接到濃度分別為2g/L，3g/L，4g/L，5g/L進行馴化.從5g/L的培養基里取1ml到以吡啶為唯一碳源的固體基礎培養基中培養，挑取單菌落在以吡啶為唯一碳源的固體基礎培養基上劃線純化，直到平板上為單一的純菌落即為純菌。

本發明的廣州蒼白桿菌P₂具有如下的形態和生理生化特性：

菌體的形態特性：

a.采用常規的細菌生理生化鑒定方法和電子顯微鏡觀察，廣州蒼白桿菌P₂的細胞為革蘭氏陰性，桿狀，大小為，菌體0.4～0.8×1.6～2.2μm，周身鞭毛。

b.菌落的形態特性：

在LB固體培養基平板上培養24h后，菌落形態為圓形，無色，透明，菌落直徑為1-2mm。

主要的生理生化特性：

嚴格好氧生長，氧化酶和接觸酶都為陽性。不能水解明膠。

上述結果表明本發明廣州蒼白桿菌P₂與蒼白桿菌屬的生理生化特性很相似。

本發明廣州蒼白桿菌P₂分子分類地位：

采用DNA小量提取方法提取細菌總DNA。采用16S?rRNA通用引物27F和1522r擴增其16S?rRNA基因；將PCR產物直接測序，將獲得的16S?rRNA基因序列輸入GenBank，通過Blastn程序對數據庫中的所有序列進行比較分析，結果發現本發明廣州蒼白桿菌P₂的16S?rRNA基因序列與蒼白桿菌屬的已有模式菌株具有較高的相似性，其中與O.aqua-oryzae?DSM?17471^T的序列相似性為97.4％。同一菌種的16S?rRNA基因序列的同源性應大于97.7％。