[發(fā)明專利]苯致再生障礙性貧血相關(guān)抗原特異TCR Vα19亞家族的Y基因序列

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710032814.3
• 申請(qǐng)日: 2007-12-26
• 公開（公告）號(hào): CN101250526A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李揚(yáng)秋;李萡;陳少華;楊力建
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12N15/10;C07K14/725
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 裘暉;陳燕嫻

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一個(gè)T細(xì)胞受體(TCR)的核苷酸序列，特別是指一種苯致再生障礙性貧血(AA)相關(guān)抗原特異TCRVα19亞家族的Y基因序列。

背景技術(shù)

苯是目前應(yīng)用最為廣泛的化工原料和工業(yè)溶劑之一。我國(guó)職業(yè)接苯工人達(dá)50萬(wàn)以上，占各種化學(xué)物職業(yè)接觸人數(shù)之首。國(guó)際癌癥研究署(IARC)和美國(guó)環(huán)境保護(hù)局(EPA)都將苯列為確證的人類致癌物。我國(guó)學(xué)者與美國(guó)國(guó)家癌癥研究所(NCI)合作對(duì)中國(guó)74828名接苯工人和3580名對(duì)照工人進(jìn)行的隊(duì)列研究證明，接苯工人發(fā)生血液淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤，如再生障礙性貧血(AA)、骨髓增生異常綜合征MDS)或白血病的相對(duì)危險(xiǎn)性明顯增加。

再生障礙性貧血是血液系統(tǒng)的一種常見病，由多種因素引起骨髓造血功能衰竭，以全血細(xì)胞減少為主要臨床表現(xiàn)的綜合征。其病因及發(fā)病機(jī)制至今雖未完全闡明，目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為AA的病理機(jī)制高度異質(zhì)，大致歸為以下三點(diǎn)：1、造血干細(xì)胞本身缺陷；2、造血微環(huán)境的損傷；3、機(jī)體異常免疫對(duì)造血的損傷。研究表明再生障礙性貧血患者發(fā)病的免疫機(jī)制中T淋巴細(xì)胞是主要效應(yīng)細(xì)胞。分子免疫學(xué)證據(jù)表明AA患者存在T細(xì)胞克隆性或寡克隆性活化增殖。國(guó)內(nèi)外對(duì)AA患者淋巴細(xì)胞異常克隆擴(kuò)增的研究主要是集中在TCRβ亞家族的錄用情況，認(rèn)為多克隆淋巴細(xì)胞被高度擴(kuò)張的寡克隆淋巴細(xì)胞取代是再障發(fā)病起始階段主要致病原因之一。

上世紀(jì)90年代中期，第一個(gè)特異性CDR3單抗成功應(yīng)用于治療I型糖尿病小鼠。目前，國(guó)外已將針對(duì)CDR3的特異性單抗的應(yīng)用于自身免疫性疾病的治療中。但有關(guān)職業(yè)接苯人群中TCRα亞家族及其互補(bǔ)決定區(qū)3(CDR3)，即與抗原特異性識(shí)別結(jié)合的部位的研究資料較少。進(jìn)一步了解苯致AA患者細(xì)胞免疫紊亂的始動(dòng)因素為AA免疫方面的研究提供新思路，同時(shí)可將所獲得的T細(xì)胞克隆作為阻斷靶點(diǎn)，為AA免疫抑制治療提供依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種苯致再生障礙性貧血相關(guān)抗原特異TCRVα19亞家族的Y基因序列。

本發(fā)明從苯致再生障礙性貧血患者外周血中存在T細(xì)胞受體(TCR)Vα亞家族的克隆性T細(xì)胞，經(jīng)序列分析顯示其特異性TCR序列的高度可變區(qū)V-N-J區(qū)，即互補(bǔ)決定區(qū)3(CDR3)，與抗原特異性識(shí)別結(jié)合的部位，表明該克隆性T細(xì)胞所表達(dá)的TCR為苯致再生障礙性貧血相關(guān)抗原刺激所產(chǎn)生的特異性TCR，獲得了苯致再生障礙性貧血相關(guān)的TCR基因序列。

本發(fā)明公開了針對(duì)苯致再生障礙性貧血相關(guān)抗原的特異性TCR的基因序列，尤其是TCR的高度可變區(qū)即CDR3，后者是T細(xì)胞表面受體識(shí)別抗原的特異區(qū)域，針對(duì)于不同抗原，除了機(jī)體所選用的TCRVα亞家族T細(xì)胞不同，更為關(guān)鍵的是其TCR基因的CDR3序列的差異，該部位決定了所屬T細(xì)胞所能識(shí)別的抗原。本發(fā)明提供了一種識(shí)別苯致再生障礙性貧血相關(guān)抗原的TCRVα19基因序列，由于其CDR3的特異性，僅來(lái)自于單一克隆的T細(xì)胞，是一高度特異的序列。同時(shí)，根據(jù)CDR3的基因序列編碼的蛋白質(zhì)，可用來(lái)了解職業(yè)接苯后的相關(guān)抗原肽，為了解苯致再生障礙性的生物學(xué)特性提供資料。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述基因序列的應(yīng)用，通過(guò)苯致再生障礙性貧血相關(guān)抗原特異的TCR基因制備對(duì)抗確定的特異性抗原的單抗，從而具備了發(fā)揮相應(yīng)特異性去除苯致再生障礙性貧血中異常增殖的T細(xì)胞克隆。

根據(jù)所獲得的接苯后相關(guān)抗原的特異性TCR的核苷酸序列，可以用于：(1)了解職業(yè)接苯人群所存在的TCRVα19亞家族T細(xì)胞的情況，用于評(píng)價(jià)病人的免疫功能狀態(tài)，早期發(fā)現(xiàn)可能的不良效應(yīng)、篩檢易感人群等方面及時(shí)提供信息。(2)借助所獲得的T細(xì)胞克隆，尋找接苯后引起AA的抗原，并采用TCR特異性單抗及TCR?DNA疫苗選擇性地取出異常T細(xì)胞克隆從而靶向治療AA。

本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：一種苯致再生障礙性貧血相關(guān)抗原特異TCRVα19亞家族的Y基因序列，所述基因序列如下所示：