[發明專利]結合藻紅膽素的藻藍蛋白熒光探針的制備方法

有效

• 申請號: 200710032712.1
• 申請日: 2007-12-19
• 公開（公告）號: CN101463356A
• 公開（公告）日: 2009-06-24
• 發明（設計）人: 伍賢軍;趙開弘;周明;夏坤
• 申請（專利權）人: 廣州天寶頌原生物科技開發有限公司;華中科技大學
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N15/31;C12N15/70;C07K14/405
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司
• 代理人: 劉 媖

1.一種結合藻紅膽素的藻藍蛋白熒光探針的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)用基因工程方法將Anabaena?sp.PCC7120中的beta裂合酶基因alr0617克隆 于表達載體，得到beta裂合酶表達質粒；

(2)用基因工程方法將Anabaena?sp.PCC7120或M.laminosus?sp.PCC7603中的 藻藍蛋白類脫輔基蛋白基因cpcB克隆于第二個表達載體中，得到脫輔基蛋白表 達質粒；

(3)用基因工程方法將Anabaena?sp.PCC7120中的藻紅膽素生物合成酶基因ho1 和Calothrix?sp.PCC7601中的藻紅膽素生物合成酶基因pebB克隆于第三個表達 載體中，得到ho1和pebB表達質粒；

(4)用基因工程方法將Calothrix?sp.PCC7601中的藻紅膽素生物合成酶基因pebA 克隆于第四個表達載體中，得到pebA表達質粒；

(5)將beta裂合酶表達質粒，脫輔基蛋白表達質粒、ho1和pebB表達質粒和pebA 表達質粒依次轉入配套的宿主菌，當這些表達質粒都轉入宿主菌后，得到相應的 工程菌，應用此工程菌通過發酵工程能生產結合藻紅膽素的藻藍蛋白類熒光蛋白 質；發酵后，按常規蛋白質提純技術，提純得到相應的結合藻紅膽素的藻藍蛋白 類熒光蛋白質。

2.一種結合藻紅膽素的藻藍蛋白熒光探針的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)用基因工程方法將Anabaena?sp.PCC7120中的beta裂合酶基因alr0617和 Anabaena?sp.PCC7120中的藻藍蛋白類脫輔基蛋白基因cpcB或M.laminosus? sp.PCC7603中的藻藍蛋白類脫輔基蛋白基因cpcB克隆于表達載體中，得到beta 裂合酶和藻藍蛋白類脫輔基蛋白表達質粒；

(2)用基因工程方法將Anabaena?sp.PCC7120中的藻紅膽素生物合成酶基因ho1 和Calothrix?sp.PCC7601中的藻紅膽素生物合成酶基因pebB克隆于第三個表達 載體中，得到ho1和pebB表達質粒；

(3)用基因工程方法將Calothrix?sp.PCC7601中的藻紅膽素生物合成酶基因pebA 克隆于第四個表達載體中，得到pebA表達質粒；

(4)將beta裂合酶和藻藍蛋白類脫輔基蛋白表達質粒、ho1和pebB表達質粒和 pebA表達質粒依次轉入配套的宿主菌，當這些表達質粒都轉入宿主菌后，得到相 應的工程菌，應用此工程菌通過發酵工程能生產結合藻紅膽素的藻藍蛋白類熒光 蛋白質；發酵后，按常規蛋白質提純技術，提純得到相應的結合藻紅膽素的藻藍 蛋白類熒光蛋白質。

3.根據權利要求1或2所述的方法，特征在于，所述的宿主菌為大腸桿菌。