[發(fā)明專利]一種根瘤固氮菌株系BXBL9及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710032270.0
• 申請(qǐng)日: 2007-12-07
• 公開（公告）號(hào): CN101182477A
• 公開（公告）日: 2008-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹桂芹;廖紅;嚴(yán)小龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A01N63/00
• 代理公司: 廣州粵高專利代理有限公司
• 代理人: 陳衛(wèi)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種根瘤固氮菌株系BXBL9及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

生物固氮是生命科學(xué)中的重大基礎(chǔ)研究課題之一，它在生產(chǎn)實(shí)際中發(fā)揮著重要作用。共生固氮是生物固氮中最重要的一種。豆科植物與根瘤菌的共生由于具有固氮能力強(qiáng)、固氮量大、抗逆能力強(qiáng)等特點(diǎn)，成為生物固氮研究的焦點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外大量試驗(yàn)證明，接種根瘤菌在多數(shù)土壤中可以提高豆科作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。接種高效根瘤菌，作為大豆增產(chǎn)的主要措施，在我國(guó)北方已得到了大面積的應(yīng)用。

當(dāng)前，大豆已成為華南廣大酸性缺磷紅壤很有價(jià)值的豆科作物之一。長(zhǎng)期以來，雖然大豆在酸性缺磷紅壤區(qū)具有一定的種植面積，但由于南方土壤偏酸性，普通根瘤菌在南方地區(qū)鮮有應(yīng)用。其中一個(gè)原因是接種根瘤菌劑，遇到了根瘤菌能否耐酸和耐鋁的問題。為了提高根瘤菌的結(jié)瘤率和固氮效果，必須選育耐酸、耐鋁的根瘤菌株以適應(yīng)酸性土壤條件，這樣才能獲得高產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供一種根瘤固氮菌株系BXBL9，該根瘤固氮菌株系是慢生根瘤菌屬的新菌株系，具有耐酸鋁、高效固氮的特點(diǎn)。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述根瘤固氮菌株系BXBL9在豆科植物共生固氮中的應(yīng)用。

本發(fā)明的上述技術(shù)目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明公開的根瘤固氮菌株系BXBL9于2007年7月28號(hào)保藏于武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其簡(jiǎn)稱為CCTCC，保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M207122。

一、根瘤固氮菌株系BXBL9的分離

1)取新鮮根瘤，用水沖洗干凈，并用濾紙吸干表面水分；

2)放入95％的酒精中處理3分鐘，再放入0.1％HgCl₂中，滅菌3～5分鐘，取出后用無菌水沖洗5～6次；

3)在用火焰滅過菌的載玻片上切成兩半，用無菌鑷子夾住半個(gè)瘤，切口面向YMA培養(yǎng)基表面劃線，YMA培養(yǎng)基的配方如表1所示，倒置后在28℃下培養(yǎng)；

表1YMA(Yeast?Mannitol?Agar)培養(yǎng)基配方(L^-1)

??試劑名??用量??試劑名??用量??甘露醇??MgSO₄·7H₂O??NaCl??酵母粉??10g??0.2g??0.1g??3g??K₂HPO₄??KH₂PO₄??CaCO₃??瓊脂??0.25g??0.25g??3g(保存時(shí)加)??15g

4)待長(zhǎng)出菌體后，先根據(jù)以下兩個(gè)方面初步判斷是否為根瘤菌：

①菌落形態(tài)：根瘤菌的菌落為圓形、乳白色、半透明、邊緣整齊、粘質(zhì)或多或少。培養(yǎng)3～5天菌落直徑達(dá)2～4mm為快生型根瘤菌，培養(yǎng)7～10滅菌落才1mm的為慢生型根瘤菌。

②菌體形態(tài)：標(biāo)記初步確認(rèn)為根瘤菌菌落，從中挑取菌苔涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，油鏡下觀察。根瘤菌為(0.5～0.9)×(1.2～0.3)μm的小桿菌。內(nèi)常含β-羥基丁酸，即折射強(qiáng)的似空洞的顆粒或使菌體呈環(huán)節(jié)狀，革蘭氏陰性(G-)，無芽孢，菌體單個(gè)或成對(duì)。

5)根據(jù)上述兩個(gè)方面，從平板上挑選形態(tài)上像根瘤菌的菌落在平板上劃線培養(yǎng)。3天之后觀察菌落情況，一直觀察到15天，因?yàn)槁鼍?～15天出現(xiàn)菌落。

二、根瘤固氮菌株系BXBL9的性質(zhì)