[發明專利]一種根瘤固氮菌株系BXYD3及其應用

有效

• 申請號: 200710032269.8
• 申請日: 2007-12-07
• 公開（公告）號: CN101182476A
• 公開（公告）日: 2008-05-21
• 發明（設計）人: 曹桂芹;廖紅;嚴小龍
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00
• 代理公司: 廣州粵高專利代理有限公司
• 代理人: 陳衛

技術領域

本發明涉及一種根瘤固氮菌株系BXYD3及其應用。

背景技術

生物固氮是生命科學中的重大基礎研究課題之一，它在生產實際中發揮著重要作用。共生固氮是生物固氮中最重要的一種。豆科植物與根瘤菌的共生由于具有固氮能力強、固氮量大、抗逆能力強等特點，成為生物固氮研究的焦點。國內外大量試驗證明，接種根瘤菌在多數土壤中可以提高豆科作物的產量和品質。接種高效根瘤菌，作為大豆增產的主要措施，在我國北方已得到了大面積的應用。

當前，大豆已成為華南廣大酸性缺磷紅壤很有價值的豆科作物之一。長期以來，雖然大豆在酸性缺磷紅壤區具有一定的種植面積，但由于南方土壤偏酸性，普通根瘤菌在南方地區鮮有應用。其中一個原因是接種根瘤菌劑，遇到了根瘤菌能否耐酸和耐鋁的問題。為了提高根瘤菌的結瘤率和固氮效果，必須選育耐酸、耐鋁的根瘤菌株以適應酸性土壤條件，這樣才能獲得高產。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術存在的問題，提供一種根瘤固氮菌株系統BXYD3，該根瘤固氮菌株系是慢生根瘤菌屬的新菌株系，具有耐酸鋁、高效固氮的特點。

本發明的另一個目的是提供上述根瘤固氮菌株系BXYD3在豆科植物共生固氮中的應用。

本發明的上述技術目的是通過以下技術方案來實現的：

本發明公開的根瘤固氮菌株系BXYD3已于2007年7月28號保藏于武漢大學中國典型培養物保藏中心，其簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC?NO：M207123。

一、根瘤固氮菌株系BXYD3的分離

1)取新鮮根瘤，用水沖洗干凈，并用濾紙吸干表面水分；

2)放入95％的酒精中處理3分鐘，再放入0.1％HgCl₂中，滅菌3～5分鐘，取出后用無菌水沖洗5～6次；

3)在用火焰滅過菌的載玻片上切成兩半，用無菌鑷子夾住半個瘤，切口面向YMA培養基表面劃線，YMA培養基的配方如表1所示，倒置后在28℃下培養；

表1YMA(Yeast?Mannitol?Agar)培養基配方(L^-1)

??試劑名??用量??試劑名??用量??甘露醇??MgSO₄·7H₂O??NaCl??酵母粉??10g??0.2g??0.1g??3g??K₂HPO₄??KH₂PO₄??CaCO₃??瓊脂??0.25g??0.25g??3g(保存時加)??15g

4)待長出菌體后，先根據以下兩個方面初步判斷是否為根瘤菌：

①菌落形態：根瘤菌的菌落為圓形、乳白色、半透明、邊緣整齊、粘質或多或少。培養3～5天菌落直徑達2～4mm為快生型根瘤菌，培養7～10天菌落才1mm的為慢生型根瘤菌。

②菌體形態：標記初步確認為根瘤菌菌落，從中挑取菌苔涂片，進行革蘭氏染色，油鏡下觀察。根瘤菌為(0.5～0.9)×(1.2～0.3)μm的小桿菌。內常含β-羥基丁酸，即折射強的似空洞的顆粒或使菌體呈環節狀，革蘭氏陰性(G-)，無芽孢，菌體單個或成對。

5)根據上述兩個方面，從平板上挑選形態上像根瘤菌的菌落在平板上劃線培養。3天之后觀察菌落情況，一直觀察到15天，因為慢生根瘤菌需7～15天出現菌落。