[發明專利]一種用HPLC指紋圖譜鑒別黑米或其制品真偽的方法

無效

• 申請號: 200710032113.X
• 申請日: 2007-12-05
• 公開（公告）號: CN101178389A
• 公開（公告）日: 2008-05-14
• 發明（設計）人: 張名位;張瑞芬;池建偉;魏振承;張雁;唐小俊
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院農業生物技術研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司
• 代理人: 宣國華

技術領域

本發明涉及一種鑒別黑米或其制品真偽的方法，尤其涉及一種用HPLC指紋圖譜鑒別黑米或其制品的真偽方法。

背景技術

隨著經濟的發展和生活水平的提高，黑米或其制品因天然的色、香、味和良好的營養保健功能越來越受到人們的關注，黑米及其制品不斷問世，并受到消費者的普遍歡迎。黑米呈色是因色素在果皮和種皮內沉積所致，其種皮部分為黑色，胚乳部分為白色，因此市面上出現了不少通過色素染色制成的假冒黑米及黑米制品，嚴重影響了消費者健康和黑色食品產業的健康發展。

目前關于黑米及其制品的鑒偽方法多以目測和紫外—可見光譜分析法，目測法人為因素很多，準確性不高；紫外—可見光譜法是基于黑米色素的主要成分花色苷類化合物在525～540nm之間有特征吸收峰，通過測定黑米浸泡液是否存在上述特征吸收峰可以辨別黑米的真偽。但由于某些其它天然色素或人工合成色素在該區域也存在特征吸收，例如甜菜紅和莧菜紅的最大吸收峰均在535nm。如果有些不法商販用上述一類的色素對普通的白糙米進行染色，在525～540nm區域內仍可以檢測到特征吸收峰，從而會影響到檢測結果的準確性。因此建立可靠的黑米及其制品的真偽鑒別技術勢在必行。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用HPLC指紋圖譜鑒別黑米或其制品真偽的方法，該方法具有穩定、精密度高、重現性好的特點。

本發明的目的通過以下技術措施來實現：

其包括以下步驟：

(1)精密稱取黑米，用乙醇浸提得到黑米浸提物，然后對黑米浸提物進行脫脂處理后，用甲醇溶解脫脂物，過濾得到上樣液；取上樣液測定黑米HPLC標準指紋圖譜；

(2)分別測定不同黑米品種的HPLC指紋圖譜，并進行比較，得到具有6個共有特征峰的黑米HPLC標準指紋圖譜，所述的共有特征峰的保留時間RT值依次為32.2，36.6，44.1，48.9，52.6，65.5分鐘；

(3)以上述相同的步驟測定待測的黑米或其制品的指紋圖譜；

(4)將待測黑米或其制品的指紋圖譜與黑米標準指紋圖譜對比，確定待測黑米或其制品的真偽。

本發明所述的步驟(1)的具體過程是：

1)精密稱取黑米，按料液重量體積比1∶4～1∶6(m/v)用50～70％的乙醇在常溫下浸提黑米20～24小時后，過濾，將浸提液減壓真空0.08-0.1MPa濃縮，得到漿狀黑米浸提物；

2)將上述浸提物用雙蒸水溶解至與步驟1)中所述的浸提液相同的體積，并加入等體積的石油醚萃取2～3次，得到黑米脫脂液；

3)將脫脂液減壓真空濃縮，得到漿狀脫脂物，再用50～60％的甲醇溶解脫脂物，并使黑米與脫脂物甲醇溶液的質量體積比為1∶2～1∶3，過0.3～0.5微米濾膜得上樣液，在4℃條件下保存備用；

4)取上樣液測定黑米HPLC標準指紋圖譜。

所述的步驟1)～3)制備上樣液的過程是一個純化的過程，目的是脫去米皮中含有的較多的脂肪酸以及其它一些脂溶性成分，一方面減少指紋圖譜中的雜峰的量另一方面可以減少雜質，提高色譜柱的使用壽命。

步驟3)中減壓真空濃縮的真空度為0.08-0.1MPa。

本發明所述測定黑米HPLC標準指紋圖譜的色譜條件：色譜柱為C₁₈，5μm，250×4.6mm；流動相為甲醇、0.5％甲酸和乙腈；洗脫方式為梯度洗脫，在線脫氣；檢測波長為254nm。

本發明測定國內外60個不同黑米品種的HPLC指紋圖譜并進行比較，得到具有6個共有特征峰的黑米HPLC標準指紋圖譜。

本發明與現有方法相比，具有以下的優點：

(1)本發明是根據60個國內外不同品種的黑米中主要的非營養素生物活性成分是水溶性成分，建立黑米及其制品的水溶性提取物HPLC指紋圖譜，從而確定其標準指紋圖譜的共有特征峰有6個，其保留時間RT值依次為32.2，36.6，44.1，48.9，52.6，65.5分鐘；將測定黑米待檢樣品的色譜圖與標準色譜圖比較，即可鑒定待測黑米及其制品的真偽，具有穩定、精密度高、重現性好的特點。

(2)將黑米整個HPLC指紋圖譜作為一個整體看待，注重各個共有特征峰的有無和相互關系，注重圖譜的整體面貌特征，為準確鑒別黑米及其制品的真偽提供了對照標準，將為黑色食品市場的健康穩定發展做出貢獻。

附圖說明

圖1是本發明實施例一的黑米標準指紋圖譜。圖中箭頭所指從左到右分別是1至6號6個共有特征峰。

圖2是本發明實施例一中市售黑米的HPLC指紋圖譜。圖中箭頭所指從左到右分別是1至6號6個共有特征峰。

具體實施方式