[發明專利]用細胞系生產豬瘟活疫苗的方法

有效

• 申請號: 200710031812.2
• 申請日: 2007-11-30
• 公開（公告）號: CN101181637A
• 公開（公告）日: 2008-05-21
• 發明（設計）人: 寧宜寶;吳文福;林旭埜;張毓金;李嘉愛;賴月輝;張國麗;岑小清;游啟有;王少英;司徒劍謀
• 申請（專利權）人: 中國獸醫藥品監察所;廣東永順生物制藥有限公司
• 主分類號: A61K39/187
• 分類號: A61K39/187;A61P31/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

???????????????????????技術領域

本發明屬于獸用生物制品技術領域，更具體是涉及一種用細胞系生產豬瘟活疫苗的方法。

???????????????????????背景技術

我國目前生產豬瘟兔化弱毒疫苗所用的細胞為牛睪丸原代細胞。由于我國牛群BVD/MDV病比較普遍，用牛睪丸原代細胞制苗，易造成細胞外源病毒污染，且產毒滴度不高，批間差異大，給疫苗產量、效力的提高帶來困難。

???????????????????????發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足之處，提供一種用細胞系生產豬瘟活疫苗的方法。該方法具有生產工藝簡單且穩定、易操作，病毒含量高，批間差異小，質量易控，可顯著提高疫苗產量和質量。利用本發明生產的豬瘟活疫苗安全性好、免疫效力高，對豬瘟強毒攻擊具有完全的免疫保護作用。

為達到上述目的，本發明采取了如下的技術方案：

1.用細胞系生產豬瘟活疫苗的方法，包括如下技術步驟：

(1)選擇細胞系作為制苗用細胞：

(2)制苗用細胞的傳代與培養：上述細胞系經EDTA-胰酶細胞分散液消化傳代，以細胞生長液繼續培養，形成良好單層時，用于繼續傳代或接種病毒；

(3)細胞毒種的繁殖：用細胞維持液，將新鮮脾毒制成病毒懸液，接種生長良好的上述細胞系單層，繼續培養；每隔4-5日收獲換液一次，取二收、三收細胞培養毒液作為生產用毒種；

細胞毒種鑒定：細胞毒種鑒定完全符合豬瘟兔化弱毒株毒種標準，對豬安全無副作用，細胞毒種每1ml含病毒≥500,000個家兔感染量；

(4)制苗毒液的繁殖：取已形成良好單層的上述細胞系培養瓶，棄去細胞生長液，接種含豬瘟兔化弱毒的維持液，繼續培養；接毒后第5日作第一次收獲換液，以后每隔4日收獲換液1次，收獲的毒液置-15℃以下保存；

制苗毒液的檢驗：按《中華人民共和國獸藥典》(2005年版)附錄15、19頁進行檢驗，應無細菌、霉菌、支原體生長。細胞毒液對豬安全無副作用，各收次病毒培養液分別用家兔測定，每1ml含病毒≥500,000個家兔感染量；

(5)配苗、分裝及凍干：將檢驗合格的病毒培養液，混合于同一容器內，加入穩定劑，同時加入抗生素，充分搖勻，定量分裝；每頭份含細胞毒液不少于0.015ml，分裝后迅速進行冷凍真空干燥后即得成品。

成品檢驗：按《中華人民共和國獸藥典》(2005年版)進行檢驗，應符合“豬瘟活疫苗(細胞源)”規定，對豬安全無副作用。每頭份疫苗含病毒≥7500個家兔感染量。

本發明是用細胞系(ST、PK15、IBRS-2)培養豬瘟兔化弱毒，收獲細胞病毒液，加適宜穩定劑，經冷凍真空干燥制成細胞系豬瘟活疫苗。

上述技術方案中，(1)步驟中的細胞系為豬睪丸(ST)細胞系、豬腎(PK15)細胞系、豬腎(IBRS-2)細胞系之一。

上述技術方案中，步驟(2)、(3)、(4)中所述的細胞培養溫度是36-37℃。

上述技術方案中，步驟(3)及(4)中所述的接種量為含3％-5％生產用細胞毒種或0.2％-0.5％脾毒種的維持液。

上述技術方案中，步驟(2)中所用生長液的配方是：90％-92％MEM液、8％-10％犢牛血清、加適量的抗菌素，pH值調整為7.0-7.2。

上述技術方案中，步驟(3)及(4)中所用維持液的配方是：95％-98％MEM液、2％-5％犢牛血清、加適量的抗菌素，pH值調整為7.2-7.4。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：

(1)用細胞系替代牛睪丸原代細胞制造豬瘟活疫苗，可解決牛源外源病原污染的問題，通過原材料和培養條件的嚴格控制，保證生產出來的疫苗純粹，確保疫苗的安全性。

(2)采用本發明培養的豬瘟細胞毒液病毒含量高，用高滴度的抗原制造的豬瘟活疫苗可以大大提高疫苗的免疫效力，經免疫攻毒試驗結果顯示，對豬瘟強毒攻擊可100％保護。

(3)用細胞系生產豬瘟活疫苗各批間質量差異小，具有生產工藝簡單穩定、易操作、產量大、成本低等特點，具備工業化大生產的可行性和可放大性，具有很好的經濟效益和應用前景。

???????????????????????附圖說明

圖1為本發明的制備流程圖。

??????????????????????具體實施例

以下結合說明書附圖及具體實施例來對本發明作進一步的描述。

實施例1