[發明專利]一種葡甘露聚糖酶的制備方法

有效

• 申請號: 200710031201.8
• 申請日: 2007-11-01
• 公開（公告）號: CN101182500A
• 公開（公告）日: 2008-05-21
• 發明（設計）人: 吳月嫦;許國煥;江永明;孟朋;鄒德良;劉剛
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所;廣東碧德生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N1/14;C12R1/885
• 代理公司: 廣州科粵專利代理有限責任公司
• 代理人: 潘偉健

技術領域

本發明涉及一種葡甘露聚糖酶的制備方法，具體來說涉及一種能降解植物類葡甘露聚糖獲得葡甘露寡糖，更能有效降解酵母類細胞壁的葡甘露聚糖酶的制備方法。

背景技術

葡甘露寡糖是一種極具應用價值的低聚糖，不但廣泛存在于魔芋等植物中，也是酵母類細胞壁的主要成分。葡甘露寡糖能明顯促進人體腸道內益生菌的增殖，減少有毒發酵產物及有害菌的產生，是人體及動物機體良好的免疫增強劑，可作為人類功能性食品添加劑或動物飼料添加劑，對提高人類健康水平和養殖動物的飼養價值有著重要意義，而寡糖衍生物用作人類藥物更有著廣闊的前景。

在中國專利ZL200510034300.2中已經揭示了一種葡甘露聚糖酶的制備方法，但是用這種方法得到的葡甘露聚糖酶只能降解魔芋精粉，局限了葡甘露寡糖的獲取途徑。

發明內容

本發明的目的在于開發出一種新的制備高活性、用途廣的葡甘露聚糖酶的方法。

我們以綠色木霉(Trichoderma?viride)CGMCC?3.2942為產霉菌株，通過在含酵母細胞壁的培養基中進行菌種培養和菌曲培養，然后再經過酶液提取，沉淀酶泥，提純等步驟，得到的葡甘露聚糖酶不但能從植物類葡甘露聚糖中降解獲得葡甘露寡糖，也能降解酵母類細胞壁物質獲取酵母葡甘露寡糖，從而實現了本發明的目的。

本發明的一種葡甘露聚糖酶的制備方法，其特征包括以下的步驟：

(1)菌種培養：選用綠色木霉(Trichoderma?viride)CGMCC3.2942為產酶菌株，斜面培養基培養菌種，得斜面菌種；

(2)菌曲培養：將斜面菌種以常規方法制成孢子懸液，并按培養基干重計，每100g固體曲培養基接入孢子懸液8～15mL的接種量進行接種，27～30℃下恒溫培養3～5天，得到菌曲，所用的固體曲培養基由質量比為1∶2.2～2.3的固體培養基和營養鹽水組成，其中的固體培養基以總質量分數100％計，由蔗渣65％～73％，麩皮15％～20％，酵母細胞壁10％～15％，魔芋精粉2.0％～4.0％組成，營養鹽水以總質量分數100％計，含硫酸銨0.45％～0.60％，磷酸二氫鉀0.046％～0.060％，硫酸鎂0.02％～0.03％，余量為水；

(3)酶液提?。簩⒕銣亟?，過濾除渣，濾液離心去沉淀得上清液為粗酶液；

(4)沉淀酶泥：將粗酶液于冰浴中加入冷凍乙醇，沉淀分離，去上清乙醇，留沉淀，得粗酶泥；

(5)提純：將粗酶泥用溶酶洗液溶解后，去沉淀，得葡甘露聚糖酶提純濃酶液。

步驟(1)所述的菌種培養可以采用現有的培養基和培養方法，例如ZL200510034300.2公開的方法，最好采用下述組成的培養基：以質量份數計，由蔗渣6份，麩皮1份，酵母細胞壁1份，魔芋精粉0.5份，硫酸銨2份，磷酸二氫鉀1份，硫酸鎂0.05份，瓊脂1.5份和水100份組成。

步驟(3)所述的酶液提取可以采用現有的方法，恒溫浸提的溫度最好是28～32℃，所述的濾液分離可采用常規的方法如離心分離等。

步驟(4)所述的沉淀酶泥可以采用現有的方法，冰浴溫度最好是-4～-12℃，所述的沉淀分離可采用常規的方法如離心分離。

步驟(5)所述的提純可以采用現有的方法。

步驟(5)得到的葡甘露聚糖酶提純濃酶液還可以通過冷凍干燥，得到粉狀葡甘露聚糖酶。

本發明以綠色木霉為產霉菌株，以來源廣泛、價廉的蔗糠為培養基主料，并添加獨具誘導功能的產酶誘導物酵母細胞壁及魔芋精粉，采用傳統的固體發酵法培養菌曲，酒精沉淀提取酶制劑，所得酶制劑經誘導由真菌產生，較普通由細菌產生的一類酶產品具有更廣譜、更高的酶活性。因此本發明的制備方法工藝簡單，設備投資少，成本低，產品提取純化易，酶活性高，整個工藝流程安全環保無污染，得到的葡甘露聚糖酶除了能高效降解植物類葡甘露聚糖(如魔芋膠)得到葡甘露寡糖外，更能有效地降解酵母類細胞壁(主要結構為葡甘露聚糖)，獲得酵母葡甘露寡糖。

具體實施方式

以下實施例是對本發明的進一步說明，不是對本發明的限制。

實施例1：

將蔗渣6g，麩皮1g，魔芋精粉0.5g，瓊脂1.5g，硫酸銨2g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.05g，和水100g混合，制成試管斜面培養基，滅菌。將通過紫外線誘變選育的綠色木霉(Trichodermaviride)CGMCC3.2942接種到上述斜面培養基中，28℃培養4天，得到孢子懸液150mL。