[發(fā)明專利]一種制備鏈霉親和素標(biāo)記的藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710030603.6
• 申請日: 2007-09-28
• 公開（公告）號: CN101397557A
• 公開（公告）日: 2009-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏坤;佟順剛
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州天寶頌原生物科技開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N15/65;C12N1/21
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 劉 媖

1.一種制備鏈霉親和素標(biāo)記的藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)的方法，其特征在于包括下述步驟：

(1)用基因工程方法，將beta155裂合酶基因克隆于表達(dá)載體中，得到beta裂合酶表達(dá)質(zhì)粒；

(2)用基因工程方法將藻紅藍(lán)蛋白類脫輔基蛋白基因和鏈霉親和素基因拼接后克隆于第二個(gè)表達(dá)載體中，可以表達(dá)鏈霉親和素和藻紅藍(lán)蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標(biāo)記的脫輔基蛋白表達(dá)質(zhì)粒；

(3)用基因工程方法將PCB生物合成酶基因hol和pcyA同時(shí)克隆于第三個(gè)表達(dá)載體中或分別克隆于第三、第四個(gè)表達(dá)載體中，得到PCB合成質(zhì)粒；

(4)將beta155裂合酶表達(dá)質(zhì)粒、鏈霉親和素標(biāo)記的脫輔基蛋白表達(dá)質(zhì)粒、PCB生物合成酶質(zhì)粒依次轉(zhuǎn)入配套的宿主菌，當(dāng)這些表達(dá)質(zhì)粒都轉(zhuǎn)入宿主菌后，得到相應(yīng)的工程菌，應(yīng)用此工程菌發(fā)酵后，按常規(guī)蛋白質(zhì)的提純技術(shù)，提純得到相應(yīng)的鏈霉親和素標(biāo)記的藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述的宿主菌為大腸桿菌。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述的beta155裂合酶基因是指Anabaena?sp.PCC7120中all5339基因。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述的藻紅藍(lán)蛋白類脫輔基蛋白基因是指Anabaena?sp.PCC7120或M.Laminosus?sp.PCC7603中pecB基因。