[發明專利]一種報春苣苔(Primulina tabacum Hance)組織培養繁殖及野外栽培方法

無效

• 申請號: 200710030266.0
• 申請日: 2007-09-17
• 公開（公告）號: CN101116423A
• 公開（公告）日: 2008-02-06
• 發明（設計）人: 馬國華;任海;張倩媚;李世晉;胡玉姬;何長信;張新華;焦德強;鄧偉雄;楊偉雄
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園;清遠市連州愛地旅游發展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/04;A01G1/00;A01G31/00
• 代理公司: 廣州科粵專利代理有限責任公司
• 代理人: 余炳和

技術領域

本發明涉及一種對珍稀瀕危植物報春苣苔(Primulina?tabacum?Hance)的離體保存和繁育的生物技術，具體地說，涉及一種對報春苣苔(Primulina?tabacum?Hance)的組織培養繁殖及野外栽培方法。

背景技術

報春苣苔(Primulina?tabacum?Hance)為苦苣苔科多年生小型草本植物，自1881年美國人亨利在粵北連州連江流域的石壁上發現了報春苣苔這一珍稀植物后，它又神秘消失了120年。直到幾年前，國內有關媒體報道了在連州又發現了報春苣苔這一國家第一批一級瀕危保護植物。它的發現對研究嶺南古氣候、土壤和動植物演變無疑具有重大的學術價值。運用植物組織培養技術開展植物的保護和繁殖在很多植物種上已獲得成功。根據不同類型的植物在離體培養所需要的培養條件及方法等方面存在很大的不同，而報春苣苔作為中國第一批重點一級保護的珍稀瀕危保護植物，由于該物種生存環境要求特殊、地理分布狹小、種群數量很少。目前運用植物生物技術繁殖和栽培報春苣苔，保護和利用這種珍稀瀕危植物，國內外均未見報道。

發明內容

為保護報春苣苔(Primulina?tabacum?Hance)這種珍稀瀕危植物，申請人開展了該植物組織培養的研究工作，成功地誘導了體細胞胚胎發生和不定芽的形成，以此建立了有效的繁殖體系和植株再生體系，并結合恢復生態原理實現了報春苣苔在原生地的種植存活，從而提出了本發明。

本發明的目的是提出一種報春苣苔(Primulina?tabacum?Hance)組織培養繁殖及野外栽培方法。

本發明所提出的報春苣苔(Primulina?tabacum?Hance)組織培養繁殖及野外栽培方法，其技術方案如下：以野外采集的報春苣苔植株葉片作為外植體，按以下步驟進行培養繁殖和栽培：

(1)誘導培養步驟：將報春苣苔植株葉片外植體接插到誘導培養基培養，誘導報春苣苔葉片外植體體細胞胚胎發生或/和不定芽的形成，在20～30℃下，于黑暗培養或每天于1～20μmol?m^-2s^-1弱光照射12～14小時，培養50～70天，在外植體能夠誘導形成體細胞胚或不定芽后，繼續培養20-30天，所述的誘導培養基以MS基本培養基，附加鈣220～440mg?L^-1，蔗糖20～30g?L^-1，pH值6.5～7.5為基礎，另配加有NAA?0.5～1.0mg?L^-1+TDZ?0.5～1.0mgL^-1，或BAP?0.5～1.0mg?L^-1+TDZ?0.2～1.0mg?L^-1，或BAP?0.5～1.0mg?L^-1+NAA0.5～1.0mg?L^-1。其中NAA?0.5～1.0mg?L^-1+TDZ?0.5～1.0mg?L^-1可誘導體細胞胚胎發生；BAP0.5～1.0mg?L^-1+NAA?0.5～1.0mg?L^-1可誘導不定芽的形成；BAP?0.5～1.0mg?L^-1+TDZ0.2～1.0mg?L^-1則可同時誘導體細胞胚和不定芽的形成。平均每個外植體能夠誘導80～90個左右的體細胞胚或不定芽。

(2)叢芽繁殖步驟：將體細胞胚或不定芽轉入到繁殖培養基上培養，條件為在20～30℃下，每天光照20～50μmol?m^-2s^-1?14小時，一個月至一個半月繼代一次，繁殖頻率可達5～8，所述的繁殖培養基以MS基本培養基，附加鈣220～440mg?L^-1，蔗糖20～30g?L^-1，pH值6.5～7.5為基礎，另配加有BAP?0.5～1.0mg?L^-1+NAA?0.1～0.5mg?L^-1；