[發明專利]石蒜生物堿作為腫瘤抗凋亡因子Mc1－1抑制劑的應用

無效

• 申請號: 200710030217.7
• 申請日: 2007-09-13
• 公開（公告）號: CN101352437A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發明（設計）人: 蔣紀愷;劉小珊
• 申請（專利權）人: 汕頭大學醫學院
• 主分類號: A61K31/437
• 分類號: A61K31/437;A61K31/407;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司
• 代理人: 溫旭

技術領域

本發明涉及藥物領域，特別涉及石蒜生物堿作為腫瘤抗凋亡因子Mcl-1(myeloid?cell?leukemia-1)抑制劑的應用。

技術背景

石蒜堿是存在于我國中藥材石蒜或水仙根中的一種主要生物堿，不溶于水，但其鹽酸鹽可溶于水。石蒜是石蒜科植物的鱗莖，我國大部分地方有產，具有驅痰、利尿、解毒、催吐的功效，用于喉風、水腫、癰疽腫毒、疔瘡、瘰疬等癥。水仙根為同科植物水仙的鱗莖，主要分布于我國東南等地，主治癰腫瘡毒、蟲咬、魚骨哽等。現已證實上述藥效主要歸因于藥材中以石蒜堿為主的多種生物堿活性成分。石蒜堿已在前蘇聯作驅痰藥使用。另據報道，石蒜堿還具有多種生物學活性，如抗病毒和體外殺傷腫瘤細胞作用等，但對腫瘤多藥耐藥細胞的作用及治療尚未見報道。

Mcl-1基因是在篩選TPA(佛波酯)誘導人髓樣白血病細胞系ML-1分化的早期反應基因時發現的，并由此命名為myeloid?cell?leukemia-1(Mcl-1)。編碼人Mcl-1基因定位于染色體1q21，其蛋白分子量約40KD，雖然Mcl-1基因在正常組織廣泛表達，但體內Mcl-1轉基因與基因敲除實驗已提示Mcl-1同造血系統的發生以及血液腫瘤的形成密切相關，不僅Mcl-1轉基因小鼠發生了淋巴瘤，而且臨床上多種血液腫瘤如白血病，淋巴瘤和多發性骨髓瘤細胞均發現Mcl-1蛋白高表達。另外其他腫瘤如黑色素瘤，肝癌與炎癥等疾病同Mcl-1密切相關。體外實驗證實，Mcl-1的過度表達可使細胞抵抗紫外(UV)，TRAIL(tumor?necrosis?factor-related?apoptosis-inducing?Ligand)以及化療藥物etoposide，staurosporine，actinomycin?D等誘導的細胞凋亡；當利用抑制Mcl-1轉錄的小分子化合物，或SiRNA，或Antisense寡核苷酸降低Mcl-1表達后，腫瘤細胞可被誘導凋亡。研究還表明Mcl-1基因功能與自身免疫性疾病密切相關。

目前報道可抑制Mcl-1基因或蛋白表達的藥物包括etoposide，staurosporine，STI-571，CDK(cyclin-dependent?kinase)抑制劑，還有flavopiridol和roscovitine以及激酶抑制劑BAY43-9006和蛋白合成抑制劑高三尖杉酯堿等。這些藥物主要通過干擾了Mcl-1表達調控機制降低了McL-1蛋白表達，如CDK抑制劑影響了Mcl-1mRNA轉錄，BAY43-9006抑制翻譯起始因子磷酸化等。但在臨床治療中因腫瘤細胞常發生對上述多數藥物耐藥導致治療失敗。

發明內容

本發明的目的是提供石蒜生物堿的應用，具體說是作為腫瘤抗凋亡因子Mcl-1異性地抑制的應用。石蒜生物堿可作為因Mcl-1基因表達異常所引起疾病的臨床藥物。

本發明所指的石蒜生物堿是從科植物石蒜或水仙根中提取的生物堿，具體說是指石蒜堿、高石蒜堿、石蒜胺堿、石蒜倫堿、雪蓮花胺堿、多花水仙堿、偽石蒜堿、雙氫石蒜堿。

本發明的石蒜生物堿還包括其臨床上可接受的鹽酸鹽、內胺鹽。

本發明石蒜生物堿的用量為臨床上可接受的用量。

本發明石蒜物物堿特別作為包括對STI571等抗腫瘤藥物多藥耐藥細胞的凋亡誘導劑。

附圖說明

圖1為流式細胞儀定量測定細胞凋亡數量。ArmexinV表示一種熒光指示劑。

圖2為Western?blot方法檢測石蒜堿作用耐藥細胞后Mcl-1蛋白被抑制，并出現細胞凋亡的特征的PARP和Caspase-3剪切。

本發明的詳述

細胞凋亡，又稱程序性細胞死亡，是與細胞壞死機制不同的，在系列調控下發生的蛋白質與DNA降解。疾病的發生同細胞凋亡調控紊亂密切相關，細胞抗凋亡特性的增強也是腫瘤發生和導致放化療失敗的常見原因。細胞凋亡的啟動有兩條途徑，即外源性的死亡受體途徑和內源性的線粒體途徑，二者分別通過Capases的級聯放大效應誘導了細胞凋亡。線粒體途徑的調控由凋亡相關蛋白Bcl-2家族成員執行，此家族成員由抗凋亡和促凋亡兩組蛋白組成。抗凋亡成員包括含4個BH結構域的Bcl-2、Bcl-xL、A1以及2個BH結構域的Mcl-1分子。促凋亡成員包括有多個結構域的Bax，Bak和含BH3-only結構域的Bid，Bim，Bad和Bik等。Mcl-1主要通過結合相關的Bak，Bim，tBid后，使這些促凋亡蛋白處于失活狀態，從而抑制細胞凋亡。