[發明專利]一種制備別藻藍蛋白類熒光蛋白質的方法有效
| 申請號： | 200710029673.X | 申請日： | 2007-08-09 |
| 公開（公告）號： | CN101144077A | 公開（公告）日： | 2008-03-19 |
| 發明（設計）人： | 夏坤;佟順剛 | 申請（專利權）人： | 廣州天寶頌原生物科技開發有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/09 | 分類號： | C12N15/09;C07K14/405 |
| 代理公司： | 廣州市南鋒專利事務所有限公司 | 代理人： | 劉媖 |
| 地址： | 510663廣東省廣州市科學*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 制備 別藻藍 蛋白 熒光 蛋白質 方法 | ||
1.一種制備別藻藍蛋白類熒光蛋白質的方法，其特征在于它包括以下步驟：
(1)將beta裂合酶基因或其同源基因克隆于表達載體中，得到beta裂合酶表達質粒；將別藻藍蛋白類脫輔基蛋白基因或其同源基因克隆于第二個表達載體中，得到脫輔基蛋白表達質粒；將藻藍膽素生物合成酶基因(ho1和pcyA)或其同源基因克隆于第三個表達載體中，得到藻藍膽素合成質粒；
(2)將beta裂合酶表達質粒或脫輔基蛋白表達質粒或藻藍膽素生物合成酶質粒依次轉入配套的宿主菌；當這些表達質粒都轉入宿主菌后，得到相應的工程菌，應用此工程菌通過發酵工程能生產別藻藍蛋白類熒光蛋白質；發酵后，按常規蛋白質提純技術，提純得到相應的別藻藍蛋白類熒光蛋白質。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：應用beta裂合酶催化藻膽色素與別藻藍蛋白類脫輔基蛋白進行共價結合而制備別藻藍蛋白類熒光蛋白質。
3.根據權利要求1和2所述的方法，其特征在于：將beta裂合酶表達質粒、脫輔基蛋白表達質粒、藻藍膽素生物合成酶質粒依次轉入配套的宿主菌；當這些表達質粒都轉入宿主菌后，得到相應的工程菌，應用此工程菌通過發酵工程能生產別藻藍蛋白類熒光蛋白質。
4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：beta裂合酶基因是指與Anabaenasp.PCC7120中a1r0617基因或Synechocystis?sp.PCC?6803中s1r2049基因同源的基因；別藻藍蛋白類脫輔基蛋白基因是指與Anabaena?sp.PCC7120或Synechocystis?sp.PCC6803中別藻藍蛋白基因同源的基因。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：beta裂合酶基因是指與Anabaena?sp.PCC7120中a1r0617基因或Synechocystis?sp.PCC?6803中s1r2049基因同源的基因；別藻藍蛋白類脫輔基蛋白基因是指與Anabaena?sp.PCC7120或Synechocystis?sp.PCC6803中別藻藍蛋白基因同源的基因。
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