[發明專利]檢測EB病毒gp78抗體的CBA試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 200710029366.1
• 申請日: 2007-07-25
• 公開（公告）號: CN101113979A
• 公開（公告）日: 2008-01-30
• 發明（設計）人: 曾益新;谷愛娣;謝彥博
• 申請（專利權）人: 中山大學腫瘤防治中心
• 主分類號: G01N33/571
• 分類號: G01N33/571;G01N33/53
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司
• 代理人: 莫瑤江

1.一種檢測EB病毒gp78抗體的CBA試劑盒，其特征是：包括有CBA偶聯微珠，該偶聯微珠是CBA空白微珠與NeutrAvidin偶聯而成，且所述NeutrAvidin與偶聯有生物素的EB病毒gp78抗原結合。

2.根據權利要求1所述的檢測EB病毒gp78抗體的試劑盒，其特征是：偶聯有生物素的FB病毒gp78抗原為人工合成的具有Biotin-Ahx-Thr?Ser?Thr?Ser?His?Arg?Pro?His?Arg?Arg?ProVal?Ser?Lys?Arg?Pro?Thr?His?Lys系列的多肽。

3.一種制備如權利要求1所述的檢測EB病毒gp78抗體的CBA試劑盒的方法，其特征是：主要包括以下步驟：

(1)準備微珠：將空白微珠渦旋混勻；取出60-80μl空白微珠，用錫箔紙包好，超聲混勻；加入1.8-2.0μl?1M?DTT，渦旋混勻；再放到搖床上，室溫，0.5-1.5hr；加入0.8-1.2ml?coupling?buffer，渦旋混勻；離心，棄上清；重復用coupling?buffer洗滌2-4次；重懸空白微珠于18-22μl?coupling?buffer；

(2)準備NeutrAvidin樣品：取出85-95μl?1mg/ml的NeutrAvidin樣品，放入錫箔紙包好的Ep管中；在NeutrAvidin樣品中加入現配的1.8-2.3μl?sulfo-SMCC；渦旋混勻；把上述NeutrAvidin樣品反應液放到搖床上，室溫，避光，0.5-1.5hr；

(3)去除未參與反應的成分：在純化柱中加滿coupling?buffer，使coupling?buffer自由流出，重復兩至三次；把純化柱離心后在其中加入步驟(2)中準備好的NeutrAvidin樣品；離心，去掉未修飾的蛋白；立即進行下一步；

(4)偶聯NeutrAvidin：把經修飾的NeutrAvidin樣品加入到步驟(1)中的準備好的空白微珠中；渦旋混勻；搖床孵育，室溫，1-2hr，避光；加入1.5-2.5μl?NEM，渦旋混勻；搖床孵育10-20min；加入0.8-1.3ml?storage?buffer；離心，棄上清；重復用storage?buffer洗滌三次；重懸于0.4-0.6ml?storage?buffer，此時終濃度大約為6×10⁶微珠/ml；4℃保存。

(5)結合多肽：取出70-80μl偶聯好NeutrAvidin的微珠放到EP管中，加入70-80μl的10μg/ml的偶聯有生物素的EB病毒gp78抗原；渦旋混勻；避光，室溫搖床孵育1-2hr，或4℃，搖床孵育過夜；離心，棄上清；加入450-500μl洗脫緩沖液，離心；重復用洗脫緩沖液洗滌一次；棄上清，加入70-80μl貯存液，混勻后4℃保存。