[發(fā)明專利]一種藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710029120.4
• 申請(qǐng)日: 2007-07-11
• 公開（公告）號(hào): CN101121931A
• 公開（公告）日: 2008-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏坤;佟順剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州天寶頌原生物科技開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/09
• 分類號(hào): C12N15/09;C12N15/52;C07K14/405
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 劉媖

1.一種藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于，它包括：

(1)采用基因工程方法，將beta裂合酶基因或其同源基因克隆于表達(dá)載體中，得到beta裂合酶表達(dá)質(zhì)粒；應(yīng)用基因工程方法將藻紅藍(lán)蛋白類脫輔基蛋白基因或其同源基因克隆于第二個(gè)表達(dá)載體中，得到脫輔基蛋白表達(dá)質(zhì)粒；應(yīng)用基因工程方法將藻藍(lán)膽素生物合成酶基因(hol和pcyA)或其同源基因克隆于第三個(gè)和(或)第四個(gè)表達(dá)載體中，得到藻藍(lán)膽素合成質(zhì)粒。

(2)將beta裂合酶表達(dá)質(zhì)粒、脫輔基蛋白表達(dá)質(zhì)粒、藻藍(lán)膽素生物合成酶質(zhì)粒依次轉(zhuǎn)入配套的宿主菌；當(dāng)這些表達(dá)質(zhì)粒都轉(zhuǎn)入宿主菌后，得到相應(yīng)的工程菌，應(yīng)用此工程菌通過發(fā)酵工程能生產(chǎn)藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)；發(fā)酵后，按常規(guī)蛋白質(zhì)提純技術(shù)，可提純得到相應(yīng)的藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：應(yīng)用beta裂合酶催化藻膽色素與藻紅藍(lán)蛋白類脫輔基蛋白進(jìn)行共價(jià)結(jié)合而制備藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的方法，其特征在于：將beta裂合酶表達(dá)質(zhì)粒、脫輔基蛋白表達(dá)質(zhì)粒、藻藍(lán)膽素生物合成酶質(zhì)粒依次轉(zhuǎn)入配套的宿主菌。當(dāng)這些表達(dá)質(zhì)粒都轉(zhuǎn)入宿主菌后，得到相應(yīng)的工程菌，應(yīng)用此工程菌通過發(fā)酵工程能生產(chǎn)藻紅藍(lán)蛋白類熒光蛋白質(zhì)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：beta裂合酶基因是指與Anabaenasp.PCC7120中alr0617基因或Synechocystis?sp.PCC?6803中slr2049基因同源的基因。藻紅藍(lán)蛋白類脫輔基蛋白基因是指與Anabaena?sp.PCC7120或Synechocystis?sp.PCC6803中藻紅藍(lán)蛋白B同源的基因。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：beta裂合酶基因是指與Anabaena?sp.PCC7120中alr0617基因或Synechocystis?sp.PCC?6803中slr2049基因同源的基因。藻紅藍(lán)蛋白類脫輔基蛋白基因是指與Anabaena?sp.PCC7120或Synechocystis?sp.PCC6803中藻紅藍(lán)蛋白B同源的基因。