[發明專利]臍血單個核細胞體外擴增并保持造血細胞植入能力的方法無效
| 申請號： | 200710029072.9 | 申請日： | 2007-07-09 |
| 公開（公告）號： | CN101121927A | 公開（公告）日： | 2008-02-13 |
| 發明（設計）人： | 毛平;王彩霞;莫文健;應逸;張玉平;林秀梅;許艷麗;王漢平;杜慶華;許力;彭盤俐 | 申請（專利權）人： | 廣州市第一人民醫院 |
| 主分類號： | C12N5/08 | 分類號： | C12N5/08;C12N13/00 |
| 代理公司： | 廣州致信偉盛知識產權代理有限公司 | 代理人： | 郭曉桂 |
| 地址： | 51018*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 單個 細胞 體外 擴增 保持 造血 植入 能力 方法 | ||
1.臍血單個核細胞體外擴增并保持造血細胞植入能力的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)取骨髓液，分離出單個核細胞，用培養液培養出骨髓基質細胞；
(2)步驟(1)培養的基質細胞層融合后，經15Gy60Co照射，洗滌；
(3)將經步驟(2)后基質細胞加入無血清培養液中；
(4)往步驟(3)的培養液中加入外源性細胞因子，建立造血細胞培養體系；
(5)從臍血中分離出單個核細胞，種植到步驟(4)建立的造血細胞培養體系中進行培養擴增。
2.根據權利要求1所述的臍血單個核細胞體外擴增并保持造血細胞植入能力的方法，其特征在于，步驟(3)所述的骨髓基質細胞為人骨髓基質細胞。
3.根據權利要求1所述的臍血單個核細胞體外擴增并保持造血細胞植入能力的方法，其特征在于，步驟(3)所述的無血清培養液為StemspanTm無血清培養液。
4.根據權利要求1所述的臍血單個核細胞體外擴增并保持造血細胞植入能力的方法，其特征在于，步驟(4)所述的外源性細胞因子包含：SCF、FL和TPO。
5.根據權利要求2所述的臍血單個核細胞體外擴增并保持造血細胞植入能力的方法，其特征在于，所述的外源性細胞因子SCF、FL和TPO的濃度均為40ng/ml。
6.根據權利要求1所述的臍血單個核細胞體外擴增并保持造血細胞植入能力的方法，其特征在于，步驟(1)中培養人骨髓基質細胞的培養液為IMDM。
7.根據權利要求1所述的臍血單個核細胞體外擴增并保持造血細胞植入能力的方法，其特征在于，步驟(5)所述的培養擴增的條件為37℃，體積分數為5％的CO2全濕培養箱中培養。
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