[發明專利]一種軍團菌培養基及其配制方法以及軍團菌試劑盒的使用方法

無效

• 申請號: 200710028581.X
• 申請日: 2007-06-15
• 公開（公告）號: CN101100650A
• 公開（公告）日: 2008-01-09
• 發明（設計）人: 陳長怡
• 申請（專利權）人: 上海科瑪嘉微生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及軍團菌檢測技術領域，尤其是一種軍團菌培養基及其配制方法、利用該培養基培養制成的軍團菌試劑盒的使用方法。

背景技術

1977年在美國首次發現了軍團菌及其引起的軍團病。此病主要表現為嚴重肺炎，并有較高的死亡率；目前在美國占細菌性肺炎發病數的第三位，因此為世界各國所高度重視；我國政府衛生部也十分關心軍團病的防治工作。但本病難以依靠臨床表現和各種臨床檢查做出診斷，而幾乎完全依賴實驗室的病原檢查方法做出確診，因而很容易漏診、誤診以至于耽誤病人的治療和預防。因此準備好并能充分供應，能夠被廣大防病醫療單位接受和常規使用的軍團病檢驗產品極為重要。軍團菌檢驗產品基本可分兩類：

(1)從臨床標本中培養檢出軍團菌；由軍團菌培養制備出來的抗原和抗體產品如血清學微量凝集試劑盒、軍團菌分型診斷血清試劑盒和軍團菌尿抗原金標層析條試劑盒、直接免疫熒光技術等，都是當前軍團病診斷的主流產品。

(2)軍團菌分子生物學診斷產品：如核酸探針、聚合酶鏈反應技術等。但此類試驗因為特異性、敏感性、價格等問題，目前仍僅作為輔助診斷方法，故未納入本系列產品的范圍。

由于軍團菌的生長需要特殊的原料——半胱氨酸、可溶性鐵和多種昂貴的進口試劑等，同時影響其生長的因素也很多，所以此類軍團菌檢驗產品的制造要求和成本都很高，故國內至今僅有零星的產品供應，且不僅質量難以保證也價格不菲；而進口產品常常缺貨，其價格更加昂貴，故至今國內包括北京、上海等大城市的絕大多數疾控中心和醫院，都未能常規開展此類檢驗項目，從而使此問題成為阻礙我國軍團病防治和研究工作進一步開展的瓶頸。

發明內容

本發明解決的技術問題之一在于提供一種有效、使用方便的軍團菌培養基及其配制方法。

本發明解決的技術問題之二在于提供一種軍團菌檢驗試劑盒的使用方法。

本發明解決的技術問題之一是通過如下技術方案實現的：主要成分包含有酵母、ACES、瓊脂、可溶性焦磷酸鐵、酮戊二酸、阿拉伯樹膠、活性炭、碳黑、KOH、L-半胱氨酸、萬古霉素、多黏菌素B、放線菌酮。

各成分的含量比為：酵母10克、ACES10克、瓊脂15克、可溶性焦磷酸鐵0.25克、酮戊二酸1克、阿拉伯樹膠3克、活性炭1.5克、碳黑2克、KOH2.8克、L-半胱氨酸0.4克、萬古霉素1毫升、多黏菌素B8萬單位、放線菌酮80毫克。

按如下方法進行配制：

先將酵母粉10克、ACES?10克、瓊脂粉15克、可溶性焦磷酸鐵0.25克、酮戊二酸1克、阿拉伯樹膠3克、活性炭1.5克、碳黑2克、KOH?2.8克和去離子水1000毫升充分混勻后并標定pH為6.9；

然后高壓121℃，取出冷卻到約50℃；

加入經0.22μ濾膜過濾的含L-半胱氨酸0.4克、萬古霉素1毫克、多黏菌素B?8萬單位、放線菌酮80毫克的5毫升液體；

再次充分混勻后傾倒平板即可。

本發明解決的技術問題之二是通過如下技術方案實現的：

按如下步驟進行：

A、準備待測血清：采集被檢者的血液1-2毫升；分離血清后，取血清200微升加入1支清潔小試管中，再加入專用稀釋液600微升混勻使成為1/4稀釋的待測血清；

B、進一步稀釋血清：取清潔稀釋用塑條1條或清潔小試管6支，于塑條上的6個孔或6個小試管中，用加液器各加入專用稀釋液200微升；然后再以待測血清順次于前5孔或管中做對倍稀釋，棄去最后的200微升稀釋血清，使各孔或管中200微升被檢血清的稀釋度為1/8，1/16，1/32，1/64和1/128；最后1孔(或管)為無血清對照；

C、用裝上1支200微升吸頭的玻璃套管，于1塊清潔的96(V形)孔板中，先加1滴(約25微升)專用稀釋液于對照排各孔，然后按低稀釋度到高稀釋度的順序，再分別加1滴于相應稀釋血清排各孔；

D、分別將裝有1支200微升吸頭的染色抗原瓶(7種)搖勻并倒置，于各孔中滴加1滴染色抗原；最后在板上加一塊玻璃蓋并置于36±1℃處，第二天取出觀察結果。

如準備待測血清步驟中使用3倍稀釋液時，可取1份稀釋液加2份滅菌蒸餾水或去離子水并混勻。

本發明改進的培養基效果如下表：

軍團菌^*在改進配方GVPC瓊脂(36℃4日)中的生長情況