[發(fā)明專利]一種測定靈芝孢子油中三萜類物質(zhì)含量的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710028256.3
• 申請日: 2007-05-28
• 公開（公告）號: CN101059430A
• 公開（公告）日: 2007-10-24
• 發(fā)明（設計）人: 徐學平;章衛(wèi)民;鐘韓;陶美華
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省微生物研究所
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N21/78;G01N21/25
• 代理公司: 廣州科粵專利代理有限責任公司
• 代理人: 潘偉健

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及一種測定靈芝孢子油中三萜類物質(zhì)含量的方法，具體來說涉及一種以香草醛為顯色劑，用比色法間接測定靈芝產(chǎn)品中三萜類物質(zhì)含量的方法。

背景技術(shù)

靈芝產(chǎn)品包括靈芝子實體，靈芝菌絲體，靈芝孢子粉和靈芝孢子油，其有效成分主要是三萜類物質(zhì)。目前以香草醛為顯色劑，用比色法簡接測定靈芝產(chǎn)品中三萜類物質(zhì)含量的方法有一些，例如于村等的方法(見參考文獻：于村，俞莎，韓見龍等.靈芝類保健食品中三萜類化合物測定方法研究.浙江預防醫(yī)學，2006，18(8)：74-75.)硫酸作用下以香草醛為顯色劑，用比色法間接測定靈芝產(chǎn)品中三萜類物質(zhì)含量，靈芝孢子油中三萜類物質(zhì)的提取采用氯仿回流，而且對照品和供試液都用氯仿定容，因氯仿有毒，可能對人體造成損害，且氯仿極易揮發(fā)，吸取供試液時，體積誤差很大，從而導致結(jié)果不準確。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，開發(fā)出一種新的測定靈芝孢子油中三萜類物質(zhì)含量的方法。

我們在用乙醇并熱水浴加熱溶解提取出靈芝孢子油中三萜類物質(zhì)，在高氯酸作用下，在冰醋酸中使之與香草醛顯色反應，以齊墩果酸為對照品，用比色法定量測定，方法穩(wěn)定，復現(xiàn)性好，測定結(jié)果準確，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。

本發(fā)明的測定靈芝孢子油中三萜類物質(zhì)含量的方法，是將靈芝孢子油中三萜類物質(zhì)提取出來，然后以香草醛為顯色劑，用比色法測定其含量，其特征在于所述的靈芝孢子油中三萜類物質(zhì)的提取方法是靈芝孢子油用乙醇在60～70℃熱水浴加熱至溶解，得供試液。

靈芝孢子油中三萜類物質(zhì)以香草醛為顯色劑的反應可以采用現(xiàn)有的方法，最好是采用香草醛冰醋酸-高氯酸溶液體系，該體系最好是：準確稱取香草醛0.20g于棕色瓶中，加冰醋酸4.0mL，冷藏，加入高氯酸16.0mL，搖勻。

本發(fā)明比色測定方法可以采用現(xiàn)有的方法，最好以齊墩果酸為對照品，最大吸收波長為549nm；包括如下步驟：精密吸取供試液于比色管中，水浴加熱揮干溶劑，加入與供試液等體積的香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋，搖勻；用紫外可見分光光度計在549nm處測吸光度值；以測得的吸光度值Y通過線性回歸方程算得試樣液中三萜的含量X。

本發(fā)明方法能檢測靈芝孢子油中三萜類物質(zhì)的含量，反應特異性強，方法穩(wěn)定，復現(xiàn)性好，方法靈敏度為0.0087/μg，最低檢出限為2μg，加標回收率98.15％。

附圖說明

圖1：齊墩果酸與香草醛化合物的吸收曲線

圖2：齊墩果酸標準曲線

圖3：齊墩果酸含量與吸光度關(guān)系曲線

具體實施方法：

以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，不是對本發(fā)明的限制。

以下實施例所采用的試劑均為分析純，儀器為UV755B紫外可見分光光度計，香草醛-冰醋酸高氯酸溶液：準確稱取香草醛0.20g于棕色瓶中，加冰醋酸4.0mL，冷藏，加入高氯酸16.0mL，搖勻；空白對照條件：加入香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液1mL于比色管中，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋。

實施例1：最大吸收波長測定

精密吸取齊墩果酸溶液液1mL于比色管中(同時做一空白)，水浴加熱揮干溶劑，加入(香草醛-冰醋酸-高氯酸)溶液1.0mL，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋，搖勻，用紫外可見分光光度計在500～600nm范圍掃描，在549nm處測得最大吸光度值，吸收曲線見附圖1。

實施例2：齊墩果酸標準曲線制備

標準溶液配制：精密稱取齊墩果酸對照品10mg，用乙醇溶解定容至100mL。

精密吸取標準溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL于比色管中(同時做一空白)，水浴加熱揮干溶劑，加入香草醛-冰醋酸-高氯酸溶液1.0mL，70℃水浴加熱15分鐘，取出冰水冷卻10分鐘，加冰醋酸5mL稀釋，搖勻，用紫外可見分光光度計在549nm處測吸光度值Y，齊墩果酸標準曲線見附圖2，計算得線性回歸方程為：Y＝8.6018X-0.0011及相關(guān)系數(shù)為R²＝0.9992。

實施例3：靈芝孢子油樣品測定

精密稱取靈芝孢子油1滴0.0302g，加入乙醇，搖動，60～70℃熱水浴加熱，同時搖動使其溶解，定容至50mL，得供試液。按實施例3測定，以測得的吸光度值Y通過線性回歸方程，用式(1)算得結(jié)果為質(zhì)量分數(shù)14.6％。