[發明專利]對趨化因子受體CXCR4具有表型敲除效應的重組蛋白及其構建方法

無效

• 申請號: 200710027715.6
• 申請日: 2007-04-26
• 公開（公告）號: CN101063130A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: 蔡紹暉;杜軍;馬偉峰;陳宏遠;蔡紹皙;譚毅;郭芝剛
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/435;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司
• 代理人: 裘暉;陳燕嫻

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種對趨化因子受體CXCR4具有表型敲除效應的重組蛋白(命名為54R/Tat/KDEL)及其構建方法。

背景技術

乳腺癌等惡性腫瘤高轉移性是致使患者病情發展、難治、惡化乃至死亡的重要原因。有效防止、延緩或阻斷腫瘤細胞轉移是提高相關腫瘤患者生存率的關鍵。人們已經注意到許多惡性腫瘤的轉移并非隨機遷徙，而是有其固有遷移路徑和特定器官。有多種學說試圖解釋這種現象。其中“土壤學說”假設不同器官提供適合特定癌細胞生長的特殊微環境；“返巢學說”則認為不同器官具有識別、吸引或捕捉特定癌細胞的能力。但對引起此現象的內在機制一直缺乏有說服力的解釋。2001年Muller等在《自然》雜志首次發表的關于趨化因子受體CXCR4(CXC?chemokine?receptor?4)與其特異性配體：基質細胞衍生因子(SDF-1，Stromal?cell-derived?factor-1)相互作用密切介導腫瘤轉移的研究成果為“返巢學說”提供了有力證據。他們證實：CXCR4在人類乳腺癌細胞及其轉移瘤的表達水平顯著高于正常乳腺細胞；與此相應，SDF-1在乳腺癌常規轉移器官，如肺、肝、骨髓、淋巴結中高水平表達，而在非常規性轉移器官的表達水平卻很低；阻斷CXCR4與SDF-1的相互作用能有效削弱乳腺癌細胞向局部淋巴結和肺組織的轉移。由此他們提出了CXCR4與SDF-1相互作用支配乳腺癌細胞進行多步驟有序的轉移模式(Muller?A.，et?al.Involvement?ofchemokine?receptors?in?breast?cancer?metastasis.Nature?2001；410(6824)：50-56)。相繼人們也發現卵巢癌(Chris?J.Scotton，et?al.Cancer?Research?2002；62(20)：5930-5938.Porcile?C，et?al.Ann?N?Y?Acad?Sci.2004；1030：162-169)、小細胞性肺癌(Takashi?Kijima，et?al.Cancer?Research?2002；62(21)：6304-6311)、前列腺癌(Russell?S.Taichman，et?al.Cancer?Res.2002；62(6)：1832-1837)、橫紋肌肉瘤(Jolanta?Libura，et?al.Blood?2002；100(7)：2597-2606.)、腎透明細胞肉瘤(PeterStaller，et?al.Nature?2003；425(6955)：307-311)、多發性骨髓瘤(MarisaParmo-et?al.Experimental?Cell?Research?2004；294(2)：571-580)、子宮內膜癌(Yayoi?Mizokami，et?al.J.Cancer：2004；110：652-659)、胰腺癌(Sato?N，etal.Cancer?Biol?Ther.2005，Jan?15；4(1))、骨肉瘤(Perissinotto?E，et?al.Clin?CancerRes.2005；15：490-497)等存在與乳腺癌相似的轉移模式。

CXCR4/SDF-1驅動癌細胞轉移模式的提出無疑為乳腺癌等惡性腫瘤轉移的有效防治開拓出嶄新思路。而如何消除原發灶與遠程特定轉移器官之間固有的SDF-1梯度，阻斷其與CXCR4相互作用則是利用CXCR4/SDF-1這一新靶點提高防治腫瘤轉移有效性的關鍵。90年代末，人們意外發現CXCR4是X4HIV-1入侵T細胞的重要輔助受體，封閉CXCR4可有效保護T細胞免遭X4HIV-1的感染。這在艾滋病病毒感染機制研究領域的突破性進展促進了CXCR4拮抗劑的研發速度(Craig?Gerard，et?al.Nature?immunity?2001；2(2)：108-115)。而在此方面的成果也為開發抗乳腺癌等腫瘤轉移的CXCR4拮抗劑奠定了基礎。新近證明：具有阻斷X4HIV-1感染T細胞活性的CXCR4拮抗劑T140能有效抑制MDA-MB-231乳腺癌細胞從植入部位向肺部的轉移(Tamamura?H，at?al.FEBS?Letters?2003；550(1-3)：79-83)。新近，Liang等運用反義RNA技術構建兩種針對乳腺癌細胞所表達的CXCR4的isRNA。經體外基質膠侵襲實驗和動物模型證實：該isRNA可抑制乳腺癌細胞CXCR4的表達，進而阻止乳腺癌細胞的轉移(Liang?Z，at?al.Cancer?Res.2005；65(3)：967-71)。