[發明專利]化妝品中紅霉素的高效液相色譜檢測方法

無效

• 申請號: 200710026853.2
• 申請日: 2007-02-09
• 公開（公告）號: CN101173912A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發明（設計）人: 鄭偉東
• 申請（專利權）人: 廣東省保化檢測中心有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N33/00;G01N30/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明是一項利用高效液相色譜儀檢測化妝品中紅霉素的新技術，尤其適用于化妝品中微量抗生素-紅霉素的定性及定量分析。

背景技術

紅霉素(Erythromycin)是一種堿性抗生素，為大環內酯類抗菌藥物，作為一種廣譜高效的抗菌藥物被廣泛應用到藥品、飼料、和化妝品中。紅霉素對革蘭陽性菌，如葡萄球菌、化膿性鏈球菌、綠色鏈球菌等有較強的抑制作用；對革蘭陰性菌，如淋球菌、螺旋桿菌、百日咳桿菌、以及流感嗜血桿菌也有相當的抑制作用；此外，對支原體、放線菌、螺旋體、立克次體、衣原體、少數分枝桿菌和阿米巴原蟲都有抑制作用。由于其廣譜高效的抑菌作用，紅霉素被一些化妝品生產廠家，添加到祛痘類產品以達到消炎、祛痘、除螨及抗粉刺的目的。但這種藥物同時也存在著很多不良反應，《中國藥典》規定紅霉素針劑僅能靜脈內給藥，嚴禁肌肉注射。若藥液不慎漏入皮下或肌肉組織，輕者可引起局部劇烈的疼痛刺激，嚴重者可導致大片皮膚壞死、粘連，愈合后常形成疤痕；此外還可阻撓性激素類的腸肝循環；過量的紅霉素能引起腹瀉、惡心、嘔吐、胃絞痛、口舌疼痛等，更嚴重的是長期接觸此類藥物會導致許多病原微生物產生抗藥性，不利于疾病的治療。因此，為保護化妝品消費者的健康安全，建立靈敏、準確、快速的化妝品中紅霉素的檢測方法是十分緊迫和必要的。

據各種文獻報道，目前藥品中紅霉素的檢測方法主要有抗生素微生物檢定法、紫外分光光度法、液相色譜法、薄層色譜法、化學發光分析、二階導數差示脈沖極譜法。抗生素微生物檢定法是《中國藥典》(2000年版)規定的檢測藥品中紅霉素的方法，該方法周期長，操作繁瑣，影響因素較多，精密度低。紫外分光光度法是比較經典的方法，但靈敏度不高，專屬性差，不適于成分復雜樣品的分析。薄層色譜法靈敏度高、選擇性好，但重復性差，且檢測步驟繁瑣。化學發光分析、二階導數差示脈沖極譜法雖然檢測靈敏度高，但存在著儀器昂貴，設備不易普及等因素。高效液相色譜方法是目前檢測紅霉素藥品較常用的方法，但也僅僅局限于各種紅霉素藥品制劑的含量檢測，而化妝品、飼料、肉類中的紅霉素含量的檢測還沒有出臺相關的標準或方法，由于藥品組分較少，基質簡單，干擾因素較少，且樣品預處理操作簡便，目標檢測物損失小，因此紅霉素藥品的含量易于檢測。與藥品不同，化妝品種類繁多，基質復雜，各成分的理化性質差別較大，干擾因素較多，尤其是紅霉素作為化妝品禁用成分添加到化妝品中，其含量較低，以上所述各種方法很難準確的檢測出化妝品中微量的紅霉素成分，而且使用高效液相色譜檢測化妝品中的紅霉素的方法還沒有文獻報道。針對以上現有技術的不足，我們設計了一種用高效液相色譜方法檢測化妝品中紅霉素的方法，該方法專屬性好，靈敏度高，且操作簡單。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測化妝品中紅霉素的分析方法，該項技術利用高效液相色譜儀不僅可以對化妝品中的紅霉素進行準確的定性分析，而且還可以進行微量的定量分析。

本發明是用無水甲醇或乙腈提取化妝品中的紅霉素，經超聲萃取、離心、過濾等一系列操作，濾除固體雜質，直至濾液澄清，取制備好的樣液上機，用磷酸二氫銨-乙腈緩沖液或磷酸二氫銨-甲醇緩沖液進行洗脫分離，在190-380nm波長下采集數據進行分析。所用高效液相色譜儀的主要配置包括十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的反相色譜柱C8柱或C18柱，檢測器為紫外檢測器或二極管陣列檢測器。

本發明方法的主要分析步驟如下：

1樣品預處理

稱取一定量的化妝品(乳、膏、霜或水劑)于10ml刻度離心管中，加入3-7ml無水甲醇或乙腈，渦旋混勻使基質充分分散，定容至刻度，再超聲提取15-30min，將提取液轉移至Eppendorf管中，12000rpm/min離心5min，如果有必要可以再用0.45μm濾膜過濾備用。

2色譜條作

(1)色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的反相色譜柱C8或C18柱；

(2)檢測器：紫外檢測器或二極管陣列檢測器；

(3)檢測波長：選用190-380nm波長作為檢測波長；

(4)流動相：采用0.01-1.00mol/L磷酸二氫銨溶液(用三乙胺調節pH值為4.0-8.0)∶乙腈＝40～80％∶60～20％緩沖溶液或采用0.01-1.00mol/L磷酸二氫銨溶液(用三乙胺調節pH值為4.0-8.0)∶甲醇＝40～80％∶60～20％緩沖溶液作為流動相，平衡色譜柱約20min，使基線平穩，該條件下保留時間適合，峰形對稱，分離度好(R＞1.5)。

(5)流速：0.5～1.5ml/min；

(6)柱溫：15～35℃。