[發(fā)明專利]一種快速測定咪唑立賓血藥濃度的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710026336.5
• 申請(qǐng)日: 2007-01-17
• 公開（公告）號(hào): CN101226172A
• 公開（公告）日: 2008-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳孝;任斌;張志豪;王長希
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N33/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，涉及體內(nèi)藥物的分析測定方法，具體涉及一種快速測定人血漿中咪唑立賓濃度的方法。

背景技術(shù)

咪唑立賓(mizoribine，MZR)是一種嘌呤核苷合成抑制劑，能特異性地抑制快速增長的淋巴細(xì)胞，從而產(chǎn)生免疫抑制作用。近年來在臨床上用于抑制腎移植時(shí)的排斥反應(yīng)，同時(shí)也用于治療狼瘡性腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及腎病綜合征等自身免疫性疾病。該藥的個(gè)體間藥動(dòng)學(xué)差異大，臨床上須進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測以調(diào)整個(gè)體化給藥方案。

目前關(guān)于生物樣本中MZR的測定方法，國內(nèi)外相關(guān)報(bào)道很少，現(xiàn)有的方法均未采用內(nèi)標(biāo)法定量，測定準(zhǔn)確度、精密度較低，且存在靈敏度低(最低定量限為0.1mg·L^-1)、操作繁瑣費(fèi)事、效率低、分析成本高等種種缺陷，不適合常規(guī)治療藥物濃度監(jiān)測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服已有技術(shù)的缺陷，提供一種簡便、快速、靈敏的測定體內(nèi)咪唑立賓血藥濃度的方法。

本方法無需昂貴的設(shè)備，無需有機(jī)溶劑，具有操作簡便、快速、血漿用量少、成本低、環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)，適合常規(guī)血藥濃度監(jiān)測。

本方法的技術(shù)方案是：待測樣品加入內(nèi)標(biāo)，經(jīng)酸性沉淀劑預(yù)處理后，經(jīng)水性流動(dòng)相在色譜柱分離，用紫外檢測器檢測。

包括下述步驟：

1)樣品預(yù)處理

取待測樣品，加入內(nèi)標(biāo)后以酸性沉淀劑進(jìn)行蛋白沉淀，

所述的內(nèi)標(biāo)為阿糖胞苷，酸性蛋白沉淀劑為0.1-0.5mol·L^-1高氯酸溶液；

2)樣品分離與分析

采用通用型的液相色譜柱，其填料為Hypersil?BDS?C18?5um，高效液相系統(tǒng)采用通用型的紫外檢測器以及高壓泵，流動(dòng)相采用含有高氯酸的10mmol·L^-1磷酸二氫鉀緩沖液(PH6.0-6.5)，等度洗脫：

本方法流動(dòng)相優(yōu)選高氯酸濃度為5-30mmol·L^-1；

采用紫外檢測器280±1nm檢測阿糖胞苷和MZR的峰面積，用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程換算成濃度。

本方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1、樣品預(yù)處理過程加入內(nèi)標(biāo)，有利于提高測定方法的準(zhǔn)確性和精密度。

2、預(yù)處理方法簡便：一步酸性沉淀劑蛋白沉淀法，適用于常規(guī)檢測。

3、專屬性強(qiáng)：采用填料為Hypersil?BDS?C18?5um的色譜柱作為固定相，含高氯酸的10mmol·L^-1磷酸二氫鉀緩沖液作為流動(dòng)相，等度洗脫，11分鐘完成測定，內(nèi)源性物質(zhì)和常用合并用藥不干擾上述藥物的測定。

4、靈敏度高：最低定量限為：0.02mg·L^-1，優(yōu)于文獻(xiàn)報(bào)道的0.1mg·L^-1。

本發(fā)明方法快速準(zhǔn)確、靈敏度高、操作簡便、成本低、適合于臨床常規(guī)血藥濃度監(jiān)測。MZR的線性范圍為0.02-10mg·L^-1。平均方法回收率為101.84％，日內(nèi)和日間精密度RSD均小于7％。

附圖說明

圖1是典型色譜圖，

其中A：未服用咪唑立賓的腎移植患者血漿；B：空白血漿+標(biāo)準(zhǔn)品咪唑立賓(濃度：0.5mg·L^-1)+內(nèi)標(biāo)阿糖胞苷(濃度：2mg·L^-1)；

1：咪唑立賓；2：阿糖胞苷。

圖2是服用咪唑立賓的腎移植患者血漿色譜圖(濃度：0.31mg·L^-1)其中，1：咪唑立賓；2：阿糖胞苷。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

色譜條件

色譜柱：Hypersil?BDS?C18(4.6×250mm，5μm，大連依利特公司)；流動(dòng)相：10mmol·L^-1磷酸二氫鉀溶液(含高氯酸10mmol·L^-1，PH6.0?6.5)；流速：1.5mL·min^-1；柱溫：室溫；檢測波長：280nm。

血漿樣品預(yù)處理

取血漿樣品200μL，加入20mg·L^-1阿糖胞苷20μL，加入蒸餾水20μL，渦旋混合30s，加入0.1mol·L^-1高氯酸，渦旋混合1min，10000r·min^-1離心5min，取上清液20μL進(jìn)樣。內(nèi)標(biāo)法以MZR與阿糖胞苷峰面積比定量。

專屬性