[發明專利]甜瓜抗蔓枯病基因位點的分子標記方法

無效

• 申請號: 200710025531.6
• 申請日: 2007-08-03
• 公開（公告）號: CN101173311A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發明（設計）人: 陳勁楓;鳩瑟夫·瓦魯考;周曉慧;李英;張永兵;婁群峰;錢春桃
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司
• 代理人: 張素卿

一、技術領域

本發明公開了甜瓜抗蔓枯病基因位點的分子標記方法，屬于生物技術領域。專用于甜瓜抗蔓枯病的分子標記輔助選擇，開展甜瓜蔓枯病抗病品種的選育與種質資源的利用。

二、技術背景

甜瓜是世界十大水果之一。由蔓枯病菌引起的甜瓜蔓枯病是嚴重的全球性真菌病害之一。它的發生常會導致毀滅性的后果。除危害甜瓜外，蔓枯病菌還侵染黃瓜、西瓜、南瓜和西葫蘆等其它葫蘆科作物，造成不同程度的減產。因此，研究防治甜瓜蔓枯病成了當前甜瓜育種中的一個迫切任務。培育抗病品種是防治甜瓜蔓枯病危害的最安全、有效而且節約成本的措施之一。

遺傳研究表明，甜瓜蔓枯病抗性主要由單基因顯性控制和單基因隱性控制兩種類型。但是目前對蔓枯病抗性基因位點的信息仍知之甚少，同時由于在選育抗病材料時傳統方法是通過接種鑒定，根據植株的表型形態學特征進行篩選，該方法有時會因為接種不充分或發病條件不適宜而影響選擇效率，難以準確、快速地篩選出具有抗病基因的個體植株。分子標記輔助選擇可以將傳統的表型選擇轉變為直接選擇基因型，在早代就可以對抗病植株進行選擇，從而大大提高選擇效率。但迄今為止，仍未見有關甜瓜蔓枯病抗性基因分子標記的研究報道。

目前在蔓枯病抗性遺傳基礎的研究及抗病育種的利用上多集中在最早發掘的抗性資源PI?140471上，而對其他抗源的利用研究很少。PI?420145具有與PI?140471相近的蔓枯病抗性，且其抗性由一對顯性單基因控制(Wolukau?et?al.2007)。

三、發明內容

技術問題

本發明涉及甜瓜蔓枯病抗性基因的分子標記方法，目的是針對傳統育種方法選育穩定甜瓜蔓枯病抗病品系難度較大、周期較長的缺陷，發掘出甜瓜蔓枯病抗病基因資源，為甜瓜的蔓枯病抗病育種提供基因資源和標記輔助選擇的技術，從而大大提高選擇效率，加快培育優良抗蔓枯病甜瓜品系的進程。

技術方案

甜瓜PI?420145抗蔓枯病基因的分子標記方法，其特征在于，該抗性基因為完全顯性基因，有四個AFLP標記與之連鎖，分別為：

1)標記EcoRI-TG/MseI-CTC₂₀₀，用AFLP選擇性標記引物

EcoRI-TG：5′-GACTGCGTACCAATTCTG-3′和

MseI-CTC：5′-GATGAGTCCTGAGTAACTC-3′

組合擴增出長度為200bp的DNA標記片段條帶；

2)標記EcoRI-AT/MseI-CTG₉₀，用AFLP選擇性標記引物

EcoRI-AT：5′-GACTGCGTACCAATTCAT-3′和

MseI-CTG：5′-GATGAGTCCTGAGTAACTG-3′

組合擴增出長度為90bp的DNA標記片段條帶；

3)EcoRI-TC/MseI-CAG₆₀，用AFLP選擇性標記引物

EcoRI-TC：5′-GACTGCGTACCAATTCTC-3′和

MseI-CAG：5′-GATGAGTCCTGAGTAACAG-3′

組合擴增出長度為60bp的DNA標記片段條帶；

4)標記EcoRI-TG/MseI-CTA70，用AFLP選擇性標記引物

EcoRI-TG：5′-GACTGCGTACCAATTCTG-3′和

MseI-CTC：5′-GATGAGTCCTGAGTAACTC-3′

組合擴增出長度為70bp的DNA標記片段條帶。

即用上述1)-4)組標記引物中任一對、二對、三對或四對引物擴增甜瓜PI420145抗蔓枯病材料的DNA，如果擴增出其對應大小的標記片段條帶，則標志著甜瓜PI420145抗蔓枯病基因的存在。

有益效果

本發明所提供的與甜瓜抗蔓枯病基因位點緊密連鎖的AFLP分子標記具有以下優點：

(1)通過本發明在國際上首次獲得4個與甜瓜抗蔓枯病基因緊密連鎖的AFLP分子標記；

(2)通過本發明分子標記方法定位的抗蔓枯病基因位點位置明確，鑒定方便。通過檢測這些與抗蔓枯病基因位點連鎖的分子標記，可以預測甜瓜植株的蔓枯病抗性，進而快速篩選抗病品種或品系用于甜瓜育種?？共』蛭稽c的檢測方便快速，不受環境影響；