[發(fā)明專利]檸檬酸濃度的測定方法及檸檬酸診斷試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710024769.7
• 申請日: 2007-06-28
• 公開（公告）號: CN101082575A
• 公開（公告）日: 2007-12-05
• 發(fā)明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司
• 代理人: 陳忠輝;姚姣陽

技術領域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥、食品、環(huán)境等領域內(nèi)對檸檬酸濃度的檢測，尤其涉及酶比色法及偶聯(lián)法測定檸檬酸濃度的方法，以及由此制得的檸檬酸診斷試劑盒，屬于檸檬酸濃度分析檢測技術領域。

背景技術

檸檬酸主要用于食品、飲料行業(yè)作為酸味劑、調(diào)味劑及防腐劑、保鮮劑，也用于制備醫(yī)藥清涼劑，還在化工行業(yè)、化妝品行業(yè)及洗滌行業(yè)中用作抗氧化劑、增塑劑、洗滌劑。

強制性國家標準GB17203-1998《食品添加劑檸檬酸鈣》規(guī)定，檸檬酸鈣含量為98.0～100.5％。國家質(zhì)檢總局組織對食品添加劑劑檸檬酸其鹽類(檸檬酸、檸檬酸鉀、檸檬酸鈉、檸檬酸鈣)產(chǎn)品質(zhì)量進行了國家監(jiān)督抽查。抽查中發(fā)現(xiàn)的主要質(zhì)量問題是檸檬酸鈣含量不合格，抽查中有個別產(chǎn)品食品添加劑檸檬酸鈣含量超過國家標準規(guī)定的要求，主要是原料碳酸鈣轉(zhuǎn)化不完全，成品中存在雜質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種測定檸檬酸濃度的方法，以及應用該方法配制而成的檸檬酸診斷試劑盒。

為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，一種酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)及偶聯(lián)法(Couple?Reaction)測定檸檬酸濃度的方法，利用檸檬酸合成酶為作用酶、蘋果酸脫氫酶為顯色酶，對待測樣品中的檸檬酸進行檢測，采用以下步驟進行：

將測定的樣品與含有輔酶A、檸檬酸合成酶、還原型輔酶、蘋果酸脫氫酶的試劑混勻，使之發(fā)生以下反應，

將最終反應物置于紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度下降的程度/速度，測算出檸檬酸濃度的大小。

上述酶比色法及偶聯(lián)法測定檸檬酸濃度的方法中，所述還原型輔酶是NADH、NADPH、thio-NADH或thio-NADPH中的一種。

實現(xiàn)本發(fā)明檸檬酸診斷試劑盒可以是單劑，由以下成分組成：

緩沖液??????????20～500mmol/L，

穩(wěn)定劑??????????1～4000mmol/L，

還原型輔酶??????0.1～0.35mmol/L，

輔酶A???????????1～50mmol/L，

檸檬酸合成酶????1000～80000U/L，

蘋果酸脫氫酶????1000～80000U/L。

試劑盒可以是干粉狀態(tài)，也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將以上單劑中的各種成分進行組合配制成雙劑，比如：

雙劑的配方不僅僅限于上述表中所列，其中試劑I的成分：還原型輔酶、輔酶A可以放在試劑II；試劑II中的檸檬酸合成酶、蘋果酸脫氫酶也可以放到試劑I，如此可以形成多種配方，不再一一列舉。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

此外，為減少各試劑成分之間的交叉影響、保持試劑的穩(wěn)定性，以便長期儲存，以上單劑、雙劑的試劑I/試劑II當中通常加入穩(wěn)定劑，濃度在1～4000mmol/L、或0.1％～100％體積比范圍之內(nèi)。

還可以將試劑配成如下三試劑：

與雙劑類似，三劑的配方也不僅僅限于上述配方，其中試劑I中的還原型輔酶、輔酶A可以放在試劑II或試劑III中，試劑II中的蘋果酸脫氫酶可以放在試劑I或試劑III中，試劑III中的檸檬酸合成酶也可以放到試劑I或者試劑II中，如此可以形成多種配方，不再一一列舉。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。