[發明專利]谷氨酸濃度的測定方法及谷氨酸診斷試劑盒

無效

• 申請號: 200710024766.3
• 申請日: 2007-06-28
• 公開（公告）號: CN101082572A
• 公開（公告）日: 2007-12-05
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N33/50;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司
• 代理人: 陳忠輝;姚姣陽

技術領域

本發明涉及醫藥、食品、環境等領域內對谷氨酸濃度的檢測，尤其涉及利用酶比色法測定谷氨酸濃度的方法，以及由此制得的谷氨酸診斷試劑盒，屬于谷氨酸濃度分析檢測技術領域。

背景技術

中國GB5009-2003味精衛生標準分析方法有：①旋光計法，②甲醛滴定法，③凱氏定氮法。味精系指以糧食及制品為原料經發酵提純的谷氨酸鈉。

酶法分析是國際上公認的谷氨酸鹽的分析方法，已被多個國際權威組織或機構采納：如IFU(國際果汁生產者協會)，AIJN(歐盟果蔬汁及飲料生產者聯盟)，及MEBAK、OICC、VDLUFA等組織廣為推崇，并確定為標準檢測方法。已被寫入澳大利亞，荷蘭，德國，瑞士等多個國家的食品法。國內也有數家果汁、酒類加工企業使用酶法試劑盒作為檢測標準。

生物體內存在分解骨質的破骨細胞和形成骨骼的成骨細胞，正常情況下兩種細胞的作用保持著良好的平衡。如果平衡被打破、破骨細胞過于活躍，就會導致骨質疏松。破骨細胞中含有谷氨酸，而一種名為“谷氨酸轉運體”的蛋白可以將谷氨酸排出破骨細胞，被“釋放”的谷氨酸會和細胞表面的受體結合，激活細胞內的酶，抑制破骨細胞分解骨質的作用。

發明內容

本發明的目的是：提供一種測定谷氨酸濃度的方法，以及應用該方法配制而成的谷氨酸診斷試劑盒。

為實現本發明的目的，一種酶比色法測定谷氨酸濃度的方法，利用谷氨酸脫氫酶為作用酶和顯色酶，對待測樣品中的谷氨酸進行檢測，采用以下步驟進行：

首先，將測定的樣品與含有輔酶、谷氨酸脫氫酶及水的試劑混勻，使之發生以下反應，

然后，將最終反應物置于紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度上升的程度/速度，測算出谷氨酸的濃度大小。

實現本發明谷氨酸診斷試劑盒可以是單劑，由以下成分組成：

緩沖液??????????20～500mmol/L，

穩定劑??????????1～4000mmol/L，

輔酶????????????1～6mmol/L，

谷氨酸脫氫酶????1000～80000U/L。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將以上單劑中的各種成分進行組合配制成雙劑，比如：

雙劑的配方不僅僅限于上述表中所列，其中試劑I的成分：輔酶可以放在試劑II；試劑II中的谷氨酸脫氫酶也可以放到試劑I，如此可以形成多種配方，不再一一列舉。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

此外，為減少各試劑成分之間的交叉影響、保持試劑的穩定性，以便長期儲存，以上單劑、雙劑的試劑I/試劑II當中通常加入穩定劑，濃度在1～4000mmol/L或0.1％～100％體積比范圍之內。

無論是單劑還是雙劑，輔酶可以是：NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一種。

用作穩定劑的物質可以是：硫酸銨(Ammonia?Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene?Glycol)、乙二醇(Ethylene?glycol)中的至少一種。

研究表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑還是雙劑，如下配方成分關系的診斷/檢測試劑盒較為理想，也是本發明的優選方案：

緩沖液??????????100mmol/L，

穩定劑??????????500mmol/L

輔酶????????????3mmol/L，

谷氨酸脫氫酶????18000U/L。