[發明專利]蘋果酸濃度的測定方法及蘋果酸診斷試劑盒

無效

• 申請號: 200710024765.9
• 申請日: 2007-06-28
• 公開（公告）號: CN101082571A
• 公開（公告）日: 2007-12-05
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N33/50;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司
• 代理人: 陳忠輝;姚姣陽

技術領域

本發明涉及醫藥、食品、環境等領域內對蘋果酸濃度的檢測，尤其涉及雙倍擴增法、酶比色法及酶聯法測定蘋果酸濃度的方法，以及由此制得的蘋果酸診斷試劑盒，屬于蘋果酸濃度分析檢測技術領域。

背景技術

傳統的分離和測定蘋果酸的方法是氣相色譜法，但分析蘋果酸時必須先進行衍生化，從而會影響分析的過程和結果。離子色譜法(IC)和高效液相色譜法(HPLC)是近年來測定蘋果酸采用比較多的方法，但是樣品處理較為復雜；蘋果酸的HPLC含量測定采用Zorbax-sbC18色譜柱，HPLC分析蘋果酸的線性范圍為0.280～9.020ug。基質固相分散是一種新樣品處理技術，濃縮了傳統樣品均化，組織細胞裂解、提取、過濾、凈化等過程，使樣品的預處理變得簡便，同時也避免了目標物的損失。

酶法分析是國際上公認的蘋果酸的分析方法，已被多個國際權威組織或機構采納：如IFU(國際果汁生產者協會)，AIJN(歐盟果蔬汁及飲料生產者聯盟)，及MEBAK，OICC，VDLUFA等組織廣為推崇，并確定為標準檢測方法。已被寫入澳大利亞、荷蘭、德國、瑞士等多個國家的食品法。

發明內容

本發明的目的是提供一種測定蘋果酸濃度的方法，以及應用該方法配制而成的蘋果酸診斷試劑盒。

為實現本發明的目的，一種雙倍擴增法、酶比色法及酶聯法測定蘋果酸濃度的方法，利用蘋果酸脫氫酶即為作用酶又是顯色酶、丙酮酸脫氫酶為顯色酶，對待測樣品中的蘋果酸進行檢測，采用以下步驟進行：

首先，將測定的樣品與含有蘋果酸脫氫酶、輔酶、丙酮酸脫氫酶、輔酶A的試劑混勻，使之發生以下反應，

然后，將最終反應物置于紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度上升的程度/速度，測算出蘋果酸濃度的大小。

上述雙倍擴增法、酶比色法及酶聯法測定蘋果酸濃度的方法中，所述輔酶是NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一種。

實現本發明蘋果酸診斷試劑盒可以是單劑，由以下成分組成：

緩沖液??????????20～500mmol/L，

穩定劑??????????1～4000mmol/L，

輔酶????????????1～6mmol/L，

輔酶A???????????1～50mmol/L，

蘋果酸脫氫酶????1000～80000U/L，

丙酮酸脫氫酶????1000～80000U/L。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將以上單劑中的各種成分進行組合配制成雙劑，比如：