[發明專利]乙醇濃度的測定方法及乙醇診斷試劑盒

在審

• 申請號: 200710024764.4
• 申請日: 2007-06-28
• 公開（公告）號: CN101082570A
• 公開（公告）日: 2007-12-05
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N33/98;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司
• 代理人: 陳忠輝;姚姣陽

技術領域

本發明涉及醫藥、食品、環境等領域內對乙醇濃度的檢測，尤其涉及酶比色法及偶聯法測定乙醇濃度的方法，以及由此制得的乙醇診斷試劑盒，屬于乙醇濃度分析檢測技術領域。

背景技術

乙醇具成癮性，酒濫用和酒依賴是當今世界范圍內最嚴重的社會經濟和公共衛生問題之一。在西方國家，酒精相關性肝病已成為死亡的第六位原因。在我國，近20年來，隨著社會經濟發展，人均酒消耗量大幅度上升，酒依賴的患病率日趨增高。

生物樣品中乙醇的定量測定方法主要有化學比色法、酶終點比色法、均相酶免疫測定法(EIA)、氣相色譜法(GC)和呼出氣乙醇分析。此外血清滲透量法可作乙醇半定量分析。

有多種化學比色法曾用于乙醇定量測定，微量擴散法是其中較簡單實用的一種，微量溢出的乙醇可使鉻酸還原成藍色的氧化鉻。

根據所用的試劑酶不同，乙醇的酶法測定分為兩種：乙醇氧化酶法和乙醇脫氫酶法，與乙醇氧化酶法相比，乙醇脫氫酶法的專一性高，不會與甲醇和丙酮起催化反應。

一般認為氣相色譜法可作為參考方法，尤其在準確性和精密度要求高的法醫學乙醇測定中應用最廣。GC法的獨特優點在于特異、靈敏，且能同時分析多種揮發性醇類物質，如乙醇、甲醇、丙酮、乙醛和異丙醇。

乙醇的其它測定方法還有：均相酶免疫分析(Homogeneous?enzymeimmunoassay)、滲透量法、呼出氣乙醇分析法；用呼出氣乙醇分析儀檢測乙醇操作簡單、快速，在交通執法部門應用較多。這類儀器中根據紅外光吸收原理設計，該法測定的乙醇濃度與酶法測得的血乙醇濃度相關性很好。

發明內容

本發明的目的是提供一種測定乙醇濃度的方法，以及應用該方法配制而成的乙醇診斷試劑盒。

為實現本發明的目的，一種酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)及偶聯法(Couple?Reaction)測定乙醇濃度的方法，利用酒精脫氫酶為作用酶、醛脫氫酶為顯色酶，對待測樣品中的乙醇進行檢測，采用以下步驟進行：

將測定的樣品與含有酒精脫氫酶、氧、輔酶、醛脫氫酶的試劑混勻，使之發生以下反應，

將最終反應物置于紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度上升的程度/速度，測算出乙醇濃度的大小。

實現本發明乙醇診斷試劑盒可以是單劑，由以下成分組成：

緩沖液????????20～500mmol/L，

穩定劑????????1～4000mmol/L，

輔酶??????????1～6mmol/L，

酒精脫氫酶????1000～80000U/L，

醛脫氫酶??????1000～80000U/L。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將以上單劑中的各種成分進行組合配制成雙劑，比如：

雙劑的配方不僅僅限于上述表中所列，其中試劑I的成分：輔酶可以放在試劑II；試劑II中的酒精脫氫酶、醛脫氫酶也可以放到試劑I，如此可以形成多種配方，不再一一列舉。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。以上單劑、雙劑當中加入穩定劑，濃度在1～4000mmol/L、或0.1％～100％體積比范圍之內。

還可以將試劑配成如下三試劑：