[發明專利]山梨醇診斷/測定試劑盒及山梨醇的濃度測定方法

無效

• 申請號: 200710024738.1
• 申請日: 2007-06-21
• 公開（公告）號: CN101329337A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種山梨醇診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定山梨醇濃度的方法，屬于醫學/食品檢驗測定技術領域。

背景技術

1872年，法國化學布斯辛特博士從山梨樹果實的果汁中分離出山梨醇，山梨醇由此得名。

山梨醇是一種重要的大噸位醫藥、化工、輕工、食品工業的原料。山梨醇具有優良的保鮮、保香、保色、保濕性，可使牙膏、化妝品、煙草、水產品、食品等產品保持水分、香味、色澤和新鮮度。

山梨醇廣泛用于食糖替代品。2000年6月國際糧農和衛生組織食品法典委員會確認山梨醇可以作為食品替代品添加到食品中，制作無糖甜食品、減肥食品、抗便秘食品、抗齲齒食品、糖尿病人食品等。

山梨醇用于牙膏的保濕、賦形劑，用于卷煙生產用的保濕劑和甜味劑，用于化妝品生產時的增濕劑和軟化劑，用于生產乳化劑、增塑劑、除垢劑、粘結劑的原料。

山梨醇用于醫藥維生素C的原料。山梨醇主要在肝臟經山梨醇脫氫酶代謝為果糖，大部分以原形由尿液排出。山梨醇為利尿脫水藥，因山梨醇大部分以原形由尿液中排出，形成血液高滲，可使周圍組織及腦實質脫水，水腫液隨藥物從尿排出，從而降低顱內壓，消除水腫。適用于治療腦水腫及青光眼。也可用于心腎功能正常的水腫少尿。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)技術，計量/連續監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定山梨醇濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的山梨醇診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行山梨醇濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明山梨醇濃度測定方法原理如下：

山梨醇+輔酶山梨醇脫氫酶山梨糖+還原型輔酶

這種方法應用山梨醇脫氫酶(sorbitol?dehydrogenase；EC?1.1.99.21)酶促反應速率比色法/終點法。山梨醇脫氫酶酶解山梨醇反應，將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度/速度，通過測量340nm處吸光度上升的程度/速度，可以測算山梨醇的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑，如下成分關系的本發明山梨醇診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液??????????100mmol/L

穩定劑??????????500mmol/L

輔酶????????????3mmol/L

山梨醇脫氫酶????10000U/L

本發明的山梨醇診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、輔酶、山梨醇脫氫酶。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、輔酶。

試劑2

緩沖液、穩定劑、山梨醇脫氫酶。

輔酶、山梨醇脫氫酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑，本發明測定山梨醇濃度的方法，其輔酶可以是NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一種。

具體實施方式

下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。

實施例一

本實施例的山梨醇診斷/測定試劑為單試劑，包括：

三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液????100mmol/L

穩定劑???????????????????????????500mmol/L

輔酶?????????????????????????????3mmol/L

山梨醇脫氫酶?????????????????????10000U/L

試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，進行冷凍干燥，制成干粉試劑；使用前，加入純凈水，復溶后使用。