[發明專利]甘油診斷/測定試劑盒及甘油的濃度測定方法

無效

• 申請號: 200710024730.5
• 申請日: 2007-06-21
• 公開（公告）號: CN101329335A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種甘油診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定甘油濃度的方法，屬于醫學/食品/環境檢驗測定技術領域。

背景技術

甘油又名丙三醇，是一種無色、無嗅、味甘的粘稠液體。甘油大量用作化工原料，用于制造合成樹脂、塑料、油漆、硝酸甘油、油脂和蜂蠟等，還用于制藥、香料、化妝品、衛生用品等工業中，甘油是食品加工業中通常使用的甜味劑和保濕劑，大多出現在運動食品和代乳品中。

歐盟的一個檢測游離甘油含量的標準是EN?14106，這個標準首先對生物柴油進行萃取，經過萃取后進行氣相色譜分析，到目前為止，已經有幾種氣相色譜分析方法被報道過。Lozano?et?al.(1996)用帶有脈沖安培檢測器的高效液相色譜來檢測從甲酯或乙酯中萃取出來的甘油溶液。

其它的檢測游離甘油含量的色譜和非色譜測試方法有：Greenhill建議了一種酶法測試的替代方法，甘油經過酶轉化后生成的H2O2用作形成醌亞胺色素的轉化物，而色素的濃度可以通過光譜法進行檢測。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，計量/連續監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定甘油濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的甘油診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行甘油濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明甘油濃度測定方法原理如下：

甘油+腺苷三磷酸甘油激酶甘油-3-磷酸+腺苷二磷酸

甘油-3-磷酸+輔酶甘油-3-磷酸脫氫酶甘油酸磷酸+還原型輔酶

這種方法應用甘油激酶(Glycerokinase；EC?2.7.1.30)偶聯甘油-3-磷酸脫氫酶(glycerol?3-phosphate?dehydrogenase；EC?1.1.1.8；EC?1.1.1.94；EC1.1.1.177)酶促反應速率比色法/終點法。甘油激酶酶解甘油反應產生甘油-3-磷酸，再通過偶聯甘油-3-磷酸脫氫酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度/速度，通過測量340nm處吸光度上升的程度/速度，可以測算甘油的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明甘油診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液??????????100mmol/L

穩定劑??????????500mmol/L

輔酶????????????3mmol/L

腺苷三磷酸??????8mmol/L

甘油激酶????????????10000U/L

甘油-3-磷酸脫氫酶???12000U/L

本發明的甘油診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、輔酶、甘油激酶、甘油-3-磷酸脫氫酶、腺苷三磷酸。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、輔酶、腺苷三磷酸。

試劑2

緩沖液、穩定劑、甘油激酶、甘油-3-磷酸脫氫酶。

輔酶、甘油激酶、甘油-3-磷酸脫氫酶、腺苷三磷酸在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、輔酶、腺苷三磷酸。

試劑2

緩沖液、穩定劑、甘油-3-磷酸脫氫酶。

試劑3

緩沖液、穩定劑、甘油激酶。

輔酶、甘油激酶、甘油-3-磷酸脫氫酶、腺苷三磷酸在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。