[發(fā)明專利]草酸診斷/測定試劑盒及草酸濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710024720.1
• 申請日: 2007-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN101329329A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/50
• 分類號(hào): G01N33/50;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種草酸診斷/測定試劑盒，同時(shí)本發(fā)明還涉及測定草酸濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品檢驗(yàn)測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

草酸作為一種最簡單的二元羧酸，普遍存在于植物界中，植物草酸具有重要的生理功能，并且在植物抗逆性中發(fā)揮積極作用。草酸多以鉀鹽或鈣鹽的形式存在，而在秋海棠、芭蕉中卻以游離酸的形式存在，草酸有毒，能溶解于水。草酸是一種重要的化工原料，廣泛用于醫(yī)藥、染料、涂料、稀土金屬的分離和提純以及衣物的漂白。

測定草酸的方法有：離子色譜法、電導(dǎo)離子色譜法、HPLC方法。臨床上大多數(shù)結(jié)石屬草酸鈣結(jié)石。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及偶聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，監(jiān)測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定草酸濃度的方法，同時(shí)，本發(fā)明還將給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的草酸診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行草酸濃度測定，而且測定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明草酸濃度測定方法原理如下：

草酸+氧草酸氧化酶二氧化碳+過氧化氫

二氧化碳++還原型輔酶甲酸脫氫酶甲酸+輔酶

這種方法應(yīng)用草酸氧化酶(oxalate?oxidase；EC?1.2.3.4)偶聯(lián)甲酸脫氫酶(formate?dehydrogenase；EC?1.2.1.2；EC?1.2.1.43)酶促反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測法/終點(diǎn)比色法。草酸氧化酶酶解草酸反應(yīng)產(chǎn)生二氧化碳，再通過偶聯(lián)甲酸脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度/速度，通過測量340nm處吸光度下降的程度/速度，可以測算草酸的濃度大小。

實(shí)驗(yàn)表明，從測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關(guān)系的本發(fā)明草酸診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液???????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑???????????????500mmol/L

還原型輔酶???????????0.25mmol/L

草酸氧化酶???????????10000U/L

甲酸脫氫酶???????????12000U/L

本發(fā)明的草酸診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、草酸氧化酶、甲酸脫氫酶。

試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、草酸氧化酶、甲酸脫氫酶。

還原型輔酶、草酸氧化酶、甲酸脫氫酶、在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、甲酸脫氫酶。

試劑3

緩沖液、穩(wěn)定劑、草酸氧化酶。

還原型輔酶、草酸氧化酶、甲酸脫氫酶在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑還是三劑，本發(fā)明測定草酸濃度的方法，其還原型輔酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一種。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例子對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。

實(shí)施例一

本實(shí)施例的草酸診斷/測定試劑為單試劑，包括：

三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液??100mmol/L

穩(wěn)定劑?????????????????????????500mmol/L

還原型輔酶?????????????????????0.25mmol/L

草酸氧化酶?????????????????????10000U/L

甲酸脫氫酶?????????????????????12000U/L